放射性 125I粒子植入治療人肺腺癌裸鼠移植瘤的有效性研究.pdf

1、目的：以人肺腺癌細(xì)胞A549裸鼠皮下移植瘤為模型，觀察不同活度的放射性125I粒子對(duì)腫瘤組織的抑瘤作用，觀察腫瘤組織病理、腫瘤細(xì)胞凋亡及增殖，進(jìn)一步探討放射性125I粒子植入對(duì)人肺腺癌裸鼠移植瘤微血管生成的影響及其作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用治療腫瘤奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：制備人肺腺癌細(xì)胞A549裸鼠皮下移植瘤模型40只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為4組，每組10只，0MBq組、22.2 MBq組、29.6 MBq組和對(duì)照組。用18 G植入針在

2、各組裸鼠瘤體內(nèi)分別植入放射活度為0、22.2和29.6 MBq125I粒子，每個(gè)移植瘤內(nèi)植入粒子1枚，對(duì)照組不予處理。植入粒子后每2天觀察腫瘤生長(zhǎng)狀況，每4天定時(shí)用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤大小，按照公式V=L×W2/2(L:最長(zhǎng)徑，W:與L相垂直的橫徑)計(jì)算腫瘤體積。粒子植入30d后處死裸鼠，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。剝?nèi)×鲶w分別進(jìn)行以下檢測(cè)：（1）常規(guī)蘇木素-伊紅(HE)染色觀察腫瘤組織病理學(xué)變化；（2）采用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導(dǎo)的 dU

3、TP缺口末端標(biāo)記方法(Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling，TUNEL)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡；（3）免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)腫瘤組織核增殖相關(guān)抗原Ki-67的表達(dá)及微血管密度（microvascular density,MVD）；（4）采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)腫瘤組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth fact

4、or,VEGF)和缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）mRNA的表達(dá)；（5）采用蛋白質(zhì)印跡Western blot法檢測(cè)腫瘤組織VEGF和HIF-1α蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）治療結(jié)束后22.2 MBq組、29.6MBq組瘤體積遠(yuǎn)小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；0 MBq組與對(duì)照組瘤體積相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，22.2MBq組與29.6 MBq組瘤體積相比差異

5、均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。（2）HE染色病理切片顯示，22.2MBq組與29.6 MBq組腫瘤組織出現(xiàn)大量變性壞死的細(xì)胞，0 MBq組與對(duì)照組腫瘤組織癌細(xì)胞排列緊密，細(xì)胞核大深染。（3）TUENL法檢查發(fā)現(xiàn)22.2 MBq組與29.6 MBq組瘤組織的凋亡指數(shù)均明顯增高，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；0 MBq組與對(duì)照組、22.2 MBq組與29.6 MBq組的凋亡指數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。（4）

6、免疫組織化學(xué)S-P法發(fā)現(xiàn)：22.2 MBq組、29.6 MBq組的Ki-67表達(dá)與對(duì)照組比較明顯降低（P＜0.05），0 MBq組與對(duì)照組、22.2MBq組與29.6MBq組Ki-67表達(dá)相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)；22.2 MBq組、29.6 MBq組的MVD與對(duì)照組比較明顯降低（P＜0.05），0 MBq組與對(duì)照組、22.2MBq組與29.6MBq組MVD相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。（5）RT-PCR檢測(cè)

7、表明，22.2 MBq組和29.6 MBq組mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；0 MBq組與對(duì)照組，22.2 MBq組與29.6 MBq組的VEGF和HIF-1α的mRNA表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。（6）Western blot結(jié)果顯示，22.2 MBq組與29.6 MBq組瘤組織VEGF和HIF-1α蛋白表達(dá)均明顯減少，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），0 MBq組與對(duì)照組以