復(fù)方四黃外洗液對(duì)MRSA的抑菌作用研究.pdf

1、目的:
　　探討復(fù)方四黃外洗液對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistantstphylococus aureu，MRSA）的抑菌作用、抑菌機(jī)制以及復(fù)方對(duì)抗MRSA生物膜的作用，為復(fù)方四黃外洗液進(jìn)一步研發(fā)并應(yīng)用于臨床感染性疾病提供基礎(chǔ)研究。
　　方法:
　　本課題主要由三部分組成。
　　(1)復(fù)方四黃外洗液及其所含單味中藥對(duì)MRSA的體外抑菌作用。紙片擴(kuò)散法(Kirby-Bauer，K-B

2、)測(cè)定不同濃度的復(fù)方四黃外洗液及其所含大黃、黃連、黃芩、黃柏、虎杖、連翹六種中藥體外抑制受試MRSA菌株在瓊脂上生長(zhǎng)的情況;試管二倍稀釋法測(cè)定復(fù)方四黃外洗液及大黃、黃連、黃芩、黃柏、虎杖、連翹抑制MRSA生長(zhǎng)的最小抑菌濃度(MIC);考察和比較復(fù)方及單藥的抑菌效果。
　　(2)復(fù)方四黃外洗液對(duì)MRSA抑菌機(jī)制研究。檢測(cè)不同濃度復(fù)方四黃外洗液作用下MRSA菌液中堿性磷酸酶(ALP)、肽聚糖的活性改變以及鉀鎂離子的滲漏情況。探討復(fù)方四

3、黃外洗液對(duì)MRSA的抑菌機(jī)制。
　　(3)復(fù)方四黃外洗液對(duì)MRSA生物膜黏附及形成的影響。剛果紅瓊脂法篩選產(chǎn)生物膜的MRSA菌株。微孔板法復(fù)制MRSA體外黏附及生物膜模型，采用CCK-8法評(píng)價(jià)不同濃度復(fù)方四黃外洗液對(duì)MRSA黏附、生物膜形成的影響;油鏡觀察MRSA物膜形成情況。
　　結(jié)果:
　　(1)復(fù)方四黃外洗液及其單味中藥均有不同程度的抑制受試MRSA在瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)，而同種藥物濃度下，量取的抑菌圈直徑從大到小

4、排列依次為:黃連＞復(fù)方＞黃芩＞大黃＞連翹＞黃柏＞虎杖，同一種藥物抑菌圈大小隨藥物濃度降低而變小，成濃度依賴性;黃連、黃芩、連翹及復(fù)方四黃外洗液對(duì)受試MRSA菌液的MIC均為31.3mg/mL，而黃柏最優(yōu)，對(duì)MRSA的MIC僅為15.7 mg/mL，大黃為62.5 mg/mL，虎杖高達(dá)125.0 mg/ml。
　　(2)復(fù)方四黃外洗液作用于MRSA菌液后可導(dǎo)致菌體細(xì)胞外ALP的活性增加以及K+、Mg2+的濃度改變，但對(duì)肽聚糖的活性無

5、明顯作用。推測(cè)復(fù)方四黃外洗液可能通過改變細(xì)菌細(xì)胞膜以及細(xì)胞壁的通透性抑制MRSA的生長(zhǎng)。
　　(3)剛果紅瓊脂實(shí)驗(yàn)中，臨床分離到的34株金黃色葡萄球(Staphylococcusaureus，S.aureus)中產(chǎn)生物膜的菌株共12株，占待測(cè)菌株35.2％，其中MSSA產(chǎn)生物膜的菌株數(shù)占22.7％，而MRSA產(chǎn)生物膜的菌株數(shù)占63.6％，MRSA產(chǎn)生物膜形成率顯著高于MSSA（P＜0.05）;產(chǎn)生物膜S.aureus菌株，即PIA

6、陽(yáng)性菌株對(duì)多種抗菌藥物存在高耐，對(duì)紅霉素、左氧氟沙星、四環(huán)素耐藥率分別為75％、50％、66.7％，其中PIA陽(yáng)性金黃色葡萄球菌對(duì)紅霉素及左氧氟沙星的耐藥率均高于與PIA陰性金黃色葡萄球菌，差異有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）。尚未發(fā)現(xiàn)耐萬(wàn)古霉素耐菌株。生物膜實(shí)驗(yàn)中，復(fù)方四黃外洗液對(duì)MRSA的黏附具有抑制作用，且抑制作用具有濃度依賴性，與陰性對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）。但是在短時(shí)間(3h)內(nèi)各組藥物對(duì)MRSA的黏附作用無明顯差異（

7、P＞0.05）;復(fù)方四黃外洗液對(duì)MRSA菌24h形成的生物膜具有抑制作用，31.25mg/mL濃度組濃度組對(duì)生物膜的抑制率達(dá)到75.3％;其作用具有濃度依賴性，除7.81mg/L濃度組及3.90mg/L濃度組外，其余各組與RPMI1640陰性對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。光鏡下，復(fù)方四黃外洗液均可抑制MRSA胞外多糖物質(zhì)的分泌。
　　結(jié)論:
　　復(fù)方四黃外洗液在體外可抑制MRSA的生長(zhǎng)，其機(jī)理可能是通過改變細(xì)菌細(xì)