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文檔簡介
1、目的:研究納米雄黃、青黛、復(fù)方黃黛對急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)細(xì)胞株NB4細(xì)胞的生長抑制和促凋亡作用,從而為進(jìn)一步研究復(fù)方黃黛治療APL的作用機(jī)制及其主要有效成分提供佐證。 方法:本實驗將通過對復(fù)方黃黛拆方研究,以APL細(xì)胞株NB4細(xì)胞為體外模型,實驗組別為四組:空白對照組、納米雄黃組、青黛組、復(fù)方黃黛組。實驗分為兩部分:(1)四噻唑藍(lán)(MTT)法檢測藥物處理NB4細(xì)胞后,細(xì)胞的生長抑制情況:首先分別應(yīng)用終濃度為0.1875
2、~12mg·L-1納米雄黃、0.235~15.04mg·L-1青黛、0.656~42mg·L-1復(fù)方黃黛處理NB4細(xì)胞24小時后,應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞生長抑制情況,并以藥物濃度對數(shù)值對抑制率作線性回歸,得直線方程,從中求出藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50),并將三個實驗組的生長抑制率進(jìn)行比較; 再分別應(yīng)用終濃度為1.5mg·L-1納米雄黃、1.88mg·L-1青黛、5.25mg·L-1復(fù)方黃黛處理NB4細(xì)胞,分別在用藥后6小時、12
3、小時、24小時、48小時、72小時用MTT檢測細(xì)胞生長抑制情況,并將作用不同時間的三個實驗組細(xì)胞的生長抑制率進(jìn)行比較。利用單因素方差分析(ANOVA)統(tǒng)計各組間是否具有顯著性差異。 (2)光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察藥物處理NB4細(xì)胞后,細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化:分別應(yīng)用終濃度為1.5mg·L-1納米雄黃、1.88mg·L-1青黛、5.25mg·L-1復(fù)方黃黛處理NB4細(xì)胞24小時后,用瑞士—吉姆薩染色、HE染色和透射電鏡觀察NB4細(xì)
4、胞形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果:(1)MTT法檢測NB4細(xì)胞的生長抑制情況:0.1875~12mg·L-1納米雄黃、0.235~15.04mg·L-1青黛、0.656~42mg·L-1復(fù)方黃黛處理NB4細(xì)胞24小時后,發(fā)現(xiàn)在這一濃度范圍內(nèi),抑制程度隨著藥物濃度的增大而逐漸增強(qiáng)。其中,納米雄黃的IC50為8.683mg·L-1,青黛的IC50為3818.172mg·L-1,復(fù)方黃黛的IC50為5.203mg·L-1。 (2)光學(xué)顯微
5、鏡和透射電子顯微鏡觀察NB4細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化:瑞士—吉姆薩染色及HE染色光鏡下觀察,可見納米雄黃組、青黛組、復(fù)方黃黛組處理NB4細(xì)胞中出現(xiàn)凋亡細(xì)胞,細(xì)胞皺縮呈圓形或呈新月形。 結(jié)論:(1)納米雄黃、青黛、復(fù)方黃黛對急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)細(xì)胞株NB4細(xì)胞的生長抑制作用與時間、濃度呈正相關(guān)性;在復(fù)方黃黛中主要是納米雄黃抑制APL細(xì)胞株NB4細(xì)胞的增殖,青黛抑制APL細(xì)胞株NB4細(xì)胞增殖的作用極小,但納米雄黃和青黛對NB4細(xì)胞
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