耐輻射球菌DNA修復(fù)蛋白的發(fā)現(xiàn)與鑒定.pdf

1、耐輻射球菌是一種革蘭氏陽性、紅色、不運動的非致病菌.最初是從輻照處理后的肉罐中分離得到的.耐輻射球菌R1菌株全基因組由兩條染色體,一個大質(zhì)粒和一個小質(zhì)粒組成.一號染色體由2,648,638個堿基對組成,二號染色體包含41 2,348個堿基對,而大質(zhì)粒和小質(zhì)粒分別由1 77,466和45,704個堿基對組成.它們共同組成了全基因組3,284,156個堿基對.耐輻射球菌最突出的特征是極強的抗電離輻射的能力.指數(shù)生長期的R1菌株即使在5kGy

2、劑量的γ-射線照射后,其生長能力也未受影響,6kGy γ-射線照射后染色體基因組產(chǎn)生約200個的雙鏈斷裂碎片,但是其基因組DNA經(jīng)修復(fù)后沒有引起任何的突變.自該細菌發(fā)現(xiàn)以來,科學家們提出各種假設(shè)試圖來解釋這種現(xiàn)象,即使全基因組測序工作也已經(jīng)完成,但耐輻射球菌真正的抗輻射機制仍然是個謎.為了研究耐輻射球菌極強的輻射抗性與DNA修復(fù)機理,我們應(yīng)用雙向電泳結(jié)合銀染的方法考察了野生型菌株KD8301在γ射線照射前后細胞體內(nèi)總蛋白組的變化情況.差

3、異蛋白經(jīng)胰蛋白酶酶切后產(chǎn)生肽片段,再利用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜得到肽指紋圖譜來鑒定.這些蛋白行使細胞的各種功能,絕大部分未曾報道與輻射抗性有關(guān).在耐輻射球菌全基因組中,大約有一半的基因產(chǎn)物功能尚未清楚.因此,解釋這些功能未知的蛋白可能會幫助我們更好的理解耐輻射球菌極端輻射抗性機理.我們的研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)了一些預(yù)測的蛋白在電離輻射后,其表達水平明顯增加或誘導,其中對兩個基因進行了基因敲除.這兩個基因的破壞子抗電離輻射的能力明顯下