sRAGE對PCOS卵巢顆粒細胞VEGF的調(diào)控作用研究.pdf

1、多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是常見的一種生殖內(nèi)分泌疾病，影響著約6％的生育期婦女，它可導致排卵障礙、生育力下降、胰島素抵抗(insulin resistance，IR)和高雄激素血癥等一系列癥狀，至今發(fā)病機制尚不清楚。有研究認為 PCOS可能存在血管生成調(diào)節(jié)機制的失調(diào)，彩色多普勒超聲顯像發(fā)現(xiàn) PCOS婦女的卵巢基質(zhì)血流增加。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial gr

2、owth factor，VEGF)是一種強效的血管生成因子，其在卵巢黃素化顆粒細胞、卵巢基質(zhì)細胞及子宮內(nèi)膜細胞中均有表達，可調(diào)節(jié)女性生殖系統(tǒng)血管的周期性生成和血管通透性，且PCOS患者卵泡液及卵巢組織中VEGF的表達均升高，推測VEGF通過影響血管生成參與了PCOS的病理生理過程。
　　可溶性晚期糖基化終產(chǎn)物受體(soluble receptor for advanced glycation end-products，sRAGE)

3、是晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)的內(nèi)源分泌型。sRAGE與RAGE競爭性地與配體AGEs結合，阻斷RAGE激活的下游細胞信號通路，因此被稱為“誘餌受體”。近年來研究表明sRAGE與慢性炎癥反應、胰島素抵抗和卵巢儲備功能密切相關，提示sRAGE可能參與了PCOS的發(fā)生。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)：PCOS患者血液和卵泡液中sRAGE濃度均低于非PCOS患者，且PCOS患者卵泡液sRAGE水平與VEGF水平呈負相關。因此，我們推測sRAGE可能

4、通過降低VEGF表達而影響PCOS的發(fā)生發(fā)展，但具體的機制尚需進一步研究。
　　雙調(diào)蛋白(amphiregulin，AREG)、β細胞素(betacellulin，BTC)和表皮調(diào)節(jié)素(epiregulin，EREG)是表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)家族的三個成員，因其結構功能與EGF相似被稱為EGF相關生長因子。EGF家族及其受體家族(ErbB家族)在女性生殖活動中具有重要作用，通過旁分泌

5、和（或）自分泌的作用參與卵巢生殖活動。研究證實這些因子在多種細胞中可以促進VEGF表達。那么在PCOS卵巢顆粒細胞中sRAGE能否降低EGF相關生長因子的表達，從而通過阻斷EGF相關生長因子通路降低VEGF合成，本實驗將就這一問題進行初步研究。
　　目的：
　　1.測定不同濃度的sRAGE在PCOS卵巢顆粒細胞中對VEGF表達的調(diào)控作用。
　　2.探討sRAGE在PCOS卵巢顆粒細胞中是否能通過阻斷EGF相關生長因子通

6、路參與對VEGF表達的調(diào)控作用。
　　材料與方法：
　　選取10例于2015年03月-2015年06月期間在鄭州大學第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心進行體外受精(in vitro fertilization，IVF)助孕治療的PCOS患者的顆粒細胞為研究對象。收集患者經(jīng)陰道超聲取卵時獲得的所有卵泡液，提取卵巢顆粒細胞行體外培養(yǎng)，培養(yǎng)48h后將每例顆粒細胞分為四組，分別加入含有不同濃度的sRAGE(0μg/ml，0.6μg/ml，0.

7、9μg/ml，1.2μg/ml)的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)顆粒細胞24h。PCOS卵巢顆粒細胞經(jīng)sRAGE干預培養(yǎng)后分為兩份，其中一份采用Trizol法提取總 RNA，然后經(jīng)實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)測定VEGF和EGF相關因子（AREG、BTC及EREG）mRNA的表達；另一份采用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測 VEGF蛋白的表達。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測卵巢顆粒細胞培養(yǎng)液中EGF相關因子：AREG、B

8、TC和EREG蛋白的表達。
　　結果：
　　1.0μg/ml，0.6μg/ml，0.9μg/ml，1.2μg/ml sRAGE濃度組，VEGF mRNA相對表達量分別為1.349±0.347，0.817±0.163，0.472±0.101，0.321±0.106，VEGF mRNA表達水平隨sRAGE濃度增加而降低，四組之間的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2.0μg/ml，0.6μg/ml，0.9μg/ml，

9、1.2μg/ml sRAGE濃度組，VEGF蛋白相對表達量分別為0.49±0.037，0.335±0.018，0.120±0.012，0.102±0.005，VEGF蛋白表達水平隨 sRAGE濃度增加而降低，四組之間的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　3. PCOS卵巢顆粒細胞經(jīng)sRAGE干預后，AREG、BTC和EREG mRNA的表達水平均降低，且三者的mRNA表達水平均隨 sRAGE濃度的增高而降低，四個濃度組之間的差

10、異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　4. PCOS卵巢顆粒細胞經(jīng)sRAGE干預后，AREG、BTC和EREG蛋白的表達水平均降低，且三者的蛋白表達水平均隨sRAGE濃度的增高而降低，四個濃度組之間的差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論：
　　1. sRAGE在PCOS卵巢顆粒細胞中可降低VEGF mRNA的表達和蛋白的合成，且呈劑量依賴性。
　　2.在PCOS卵巢顆粒細胞中，sRAGE可通過阻斷 E