紫杉醇多肽水凝膠在抑制青光眼濾過術(shù)后瘢痕化中作用的研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　本研究試圖構(gòu)建一種新型紫杉醇-多肽超分子水凝膠藥物控釋系統(tǒng)，將該控釋系統(tǒng)應(yīng)用于兔眼青光眼小梁切除術(shù)后的結(jié)膜瓣下，觀察其在兔眼結(jié)膜下的生物相容性，探討其在兔眼小梁切除術(shù)后抑制瘢痕化作用中的研究。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　本實(shí)驗(yàn)首先通過紫杉醇與丁二酸酐進(jìn)行羧基衍生化反應(yīng)，再與苯丙氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-谷氨酸（FFFE）短肽序列連接起來(lái)形成親水性的成膠前體分子。前體分子在PH=7.4的PBS溶液中，通過酯鍵斷

2、裂釋放出紫杉醇分子，分子間通過相互作用自組裝行為得到FFFE多肽超分子水凝膠，通過化學(xué)交聯(lián)構(gòu)建紫杉醇多肽超分子水凝膠控釋體系。隨后對(duì)紫杉醇多肽超分子水凝膠進(jìn)行理化性質(zhì)的表征，包括透射電鏡（TEM）觀察其微觀形貌、流變儀檢測(cè)其流體學(xué)性能。采用德雷茲染眼實(shí)驗(yàn)（Draize test）、熒光素鈉染色、裂隙燈、角膜內(nèi)皮鏡、前節(jié)光學(xué)相干斷層掃描（optical coherence tomography, OCT）等綜合評(píng)價(jià)空白多肽超分子水凝膠(H

3、ydrogel)、紫杉醇多肽超分子水凝膠（PTX-GEL）結(jié)膜下注射后對(duì)日本大耳白兔眼部的刺激性和組織相容性。
　　建立小梁切除術(shù)后的動(dòng)物模型，48只日本大耳白兔被隨機(jī)分為四組，每組12只，右眼為術(shù)眼，單純小梁切除術(shù)組(Control組)；術(shù)后結(jié)膜下注射空白多肽水凝膠組（Hydrogel組）；術(shù)中結(jié)膜下放置絲裂霉素棉片并用生理鹽水沖洗組（MMC組）；術(shù)后結(jié)膜下注射紫杉醇多肽水凝膠組（PTX-GEL組）。術(shù)前及術(shù)后通過對(duì)術(shù)眼進(jìn)行眼內(nèi)

4、壓（intra-ocular pressure，IOP）測(cè)量，手術(shù)顯微鏡拍攝，眼前節(jié)OCT掃描，濾過泡區(qū)域進(jìn)行組織切片及H&E染色等，觀察濾過泡形態(tài)及濾過泡區(qū)域瘢痕化情況，從而統(tǒng)計(jì)濾過泡生存時(shí)間并評(píng)價(jià)濾過泡的治療效果。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　本實(shí)驗(yàn)成功合成了苯丙氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-谷氨酸（FFFE）的小分子多肽，并構(gòu)建了紫杉醇多肽超分子水凝膠控釋體系。兔眼結(jié)膜下注射空白多肽水凝膠和紫杉醇多肽水凝膠與生理鹽水對(duì)照組比較觀察

5、，顯示了兩者具有良好的生物相容性。青光眼濾過術(shù)后角膜水腫和結(jié)膜充血評(píng)分發(fā)現(xiàn)，MMC組導(dǎo)致的角膜水腫和結(jié)膜充血情況較PTX-GEL組嚴(yán)重。對(duì)不同時(shí)間段IOP進(jìn)行測(cè)量和濾過泡形態(tài)觀察比較，在Hydrogel組濾過術(shù)眼的IOP和濾過泡生存時(shí)間略長(zhǎng)于Control組，提示術(shù)眼結(jié)膜下注射空白多肽水凝膠有一定的降低IOP和延長(zhǎng)濾過泡存在的作用。PTX-GEL組和MMC組濾過泡的生存時(shí)間均明顯長(zhǎng)于Control組和Hydrogel組；IOP在術(shù)后35

6、天也明顯比其余組低，表明在術(shù)后35天時(shí)該兩組濾過道仍有較好的濾過功能。術(shù)后第35天時(shí)，MMC組濾過泡形態(tài)雖然呈較高隆起，手術(shù)顯微鏡拍攝照片顯示其濾過泡形態(tài)外表良好，但前節(jié)OCT顯示濾過泡區(qū)域幾乎被厚的瘢痕組織覆蓋，濾過通道已變得十分狹窄；組織切片可以觀察到比較明顯鞏膜彈性纖維紊亂和虹膜脫色素現(xiàn)象，濾過區(qū)域纖維組織覆蓋情況較PTX-GEL組嚴(yán)重，大部分濾過通道變的狹窄。然而在第35天時(shí)， PTX-GEL組前節(jié)OCT顯示部分的濾過泡形狀雖然

7、有一定程度的縮小，但濾過泡區(qū)域僅較少部分被纖維組織覆蓋，濾過通道存在仍然比較明顯；組織切片染色顯示術(shù)眼濾過瘺道仍明顯存在，濾過區(qū)域未見明顯增殖的成纖維細(xì)胞及炎癥細(xì)胞，且鞏膜彈性纖維排列較整齊。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
　　紫杉醇能從成膠前體分子通過酯鍵水解釋放出來(lái)，并自通過自主裝行為形成小分子多肽水凝膠，將其應(yīng)用于兔眼小梁切除術(shù)后，發(fā)現(xiàn)其可以延長(zhǎng)濾過泡的生存時(shí)間，并維持濾過泡的正常形態(tài)，降低小梁切除術(shù)后的IOP，抑制兔眼小梁切除術(shù)后