CTGF ASODN抗兔青光眼術(shù)后濾過(guò)泡疤痕形成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)以青光眼濾術(shù)過(guò)后兔為模型，通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)結(jié)締組織生長(zhǎng)因子反義核苷酸 (connective tissue growth factor antisenseoligonucleotide，CTGF ASODN)干擾體外培養(yǎng)兔眼結(jié)膜成纖維細(xì)胞增生，觀察結(jié)締組織生長(zhǎng)因子反義寡核苷酸對(duì)濾過(guò)手術(shù)后濾過(guò)泡瘢痕形成的影響；研究結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在抗青光眼手術(shù)后濾過(guò)泡疤痕形成中的作用；為抗濾過(guò)泡區(qū)瘢痕提出了新的解決思路。 方法：取兔眼小

2、梁切除術(shù)后第5d之手術(shù)區(qū)結(jié)膜及板層鞏膜行成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)。利用脂質(zhì)體介導(dǎo)，將經(jīng)異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC)標(biāo)記的結(jié)締組織生長(zhǎng)因子反義核苷酸轉(zhuǎn)染至兔抗青光眼(glaucoma filtering surgery，GFS)后濾過(guò)泡疤痕組織成纖維細(xì)胞中，利用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription polymerasechain reaction，RT-PCR

3、)和檢驗(yàn)結(jié)締組織生長(zhǎng)因子mRNA的表達(dá)，用蛋白免疫印跡法(Western-Blot法)檢驗(yàn)蛋白合成量。以相對(duì)灰度值為指標(biāo)，觀察CTGFASODN對(duì)CTGF表達(dá)的抑制效果。 結(jié)果： (1)轉(zhuǎn)染結(jié)締組織生長(zhǎng)因子反義寡核苷酸6h后可見(jiàn)研究組(A組)細(xì)胞胞漿中黃綠色熒光。12h后，研究組細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)大量熒光，對(duì)照組僅見(jiàn)少量熒光或無(wú)此現(xiàn)象； (2)研究組CTGF在mRNA水平的相對(duì)灰度值(mRNAindex，RI)明顯低