重組人核糖核酸酶抑制因子對青光眼濾過術后瘢痕形成抑制作用的研究.pdf

1、背景介紹：人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor．hRI)是核糖核酸酶A(RNase A)的抑制劑，廣泛存在于哺乳動物細胞漿中，它可與中性及堿性RNase A以1：1結合抑制其活性。血管生成素(angiogenin，Ang)是近來發(fā)現(xiàn)的一種強效的促血管生成因子，在眼部生理和病理性新生血管生成過程中，在大部分環(huán)節(jié)都發(fā)揮著重要作用。由于Ang與RNase A有35﹪的同源性，且立體結構也極其相似，因此

2、二者均可作為配體與RI緊密結合，且RI與Ang的親和力比與RNaseA的親和力還要大60倍，因此我們推測RI通過與Ang結合，可以抑制新血管生成，本室已經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)RI可以抑制腫瘤組織周圍的血管形成。 目的：利用基因工程生產(chǎn)的方法，探究在最優(yōu)條件下使融合蛋白GST-hRI可溶性表達；用GST-hRI對小梁切除術后的兔眼給藥，探究通過hRI抑制傷口肉芽組織中新血管生成，進而抑制病理性瘢痕的形成，建立功能性的濾過通道和濾過泡，從而提高

3、青光眼小梁切除術的成功率。 方法：通過優(yōu)化誘導劑IPTG的誘導濃度和誘導溫度得到目的融合蛋白GST-hRI的可溶性表達。將多次培養(yǎng)的菌體收集，經(jīng)超聲破碎，收集離心后的上清，采用RNase A Glutathione．Sepharose 4B親和層析柱分離純化目的融合蛋白。對兔眼行小梁切除術，制備青光眼動物模型。實驗組術前1天、術后每天用hRI滴眼，術后第14天處死動物取手術區(qū)組織。觀測統(tǒng)計術后濾過泡的類型，并作組織切片進行HE染

4、色觀察微血管密度，評估該融合蛋白對兔眼小梁切除術后手術區(qū)新血管生成和瘢痕形成的抑制作用。 結果：0.5mmol/L IPTG，16℃誘導表達8～10小時，超聲破碎菌體得到可溶性大量表達的GST-hRI。治療組的手術區(qū)新生血管數(shù)量少于對照組，瘢痕形成小，功能性濾過泡比例高。 結論：青光眼濾過術后用hRI滴眼，hRI通過與Ang結合可以有效抑制手術區(qū)肉芽組織中血管新生，進而抑制瘢痕的形成，使功能性濾過泡易形成，保證房水的順暢