滋腎降糖丸防治糖尿病骨質(zhì)疏松的臨床及基于代謝組學(xué)的實驗研究.pdf

1、目的:
　　一、臨床研究部分:
　　本部分研究通過滋腎降糖丸對2型糖尿病患者糖脂代謝及血清硬化蛋白的作用，及其與病程、年齡、糖代謝、脂代謝等的相關(guān)性，探討滋腎降糖丸對2型糖尿病的治療作用及其對血清硬化蛋白的影響，為中醫(yī)藥對2型糖尿病及其引起的糖尿病性骨質(zhì)疏松的治療提供理論依據(jù)。
　　二、實驗研究部分:
　　本部分研究旨在探討具有益氣養(yǎng)陰、補腎強骨作用的滋腎降糖丸對糖尿病性骨質(zhì)疏松的作用，并通過代謝組學(xué)研究其差異性

2、代謝產(chǎn)物，探討滋腎降糖丸對糖尿病性骨質(zhì)疏松的治療作用和可能的機制。
　　方法:
　　一、臨床研究部分:
　　收集在深圳市中醫(yī)院內(nèi)分泌住院病人中符合2型糖尿病診斷的腎陰虛證患者各30例，觀察兩組患者基本情況、腎陰虛證證候積分及血糖、血脂等生化指標(biāo)的差異，用酶聯(lián)免疫吸附(Elisa)法檢測血清硬化蛋白水平。
　　二、實驗研究部分:
　　通過高效液相色譜法初步檢測滋腎降糖丸所含主要化學(xué)成分。采用腹腔注射鏈脲佐菌素

3、建立大鼠糖尿病性骨質(zhì)疏松模型，將大鼠隨機分為模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組，各治療組分別給與相應(yīng)藥物灌胃治療，另設(shè)正常對照組，干預(yù)12周后，觀察各組大鼠口服葡萄糖糖耐量試驗(OGTT)、糖代謝相關(guān)指標(biāo)、血脂、骨代謝標(biāo)志物含量差異，骨硬組織切片HE染色及掃描電鏡觀察骨組織形態(tài)學(xué)變化。同時通過HE染色、免疫熒光雙標(biāo)、透射電子顯微鏡觀察DOP大鼠胰島組織形態(tài)及微結(jié)構(gòu)改變，以及不同劑量滋腎降糖丸對其治療作用。最后，用1H NMR法檢測大鼠血

4、清和尿液的代謝產(chǎn)物變化。
　　成果:
　　一、臨床研究部分:
　?。ㄒ唬┳棠I降糖丸治療組較對照組可明顯改善臨床癥狀，降低腎陰虛證證候積分，改善T2DM患者的糖脂代謝。
　?。ǘ┳棠I降糖丸治療組較對照組可明顯降低血清硬化蛋白水平。
　?。ㄈ┫嚓P(guān)性分析發(fā)現(xiàn)患者糖尿病病程、糖化血紅蛋白、LDL-c水平與血清硬化蛋白呈正相關(guān)(P＜0.05)，其他因素與證候積分無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。
　　二、實驗研

5、究部分:
　?。ㄒ唬ψ棠I降糖丸成分的初步檢測發(fā)現(xiàn)其五種有效成分為:三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、淫羊藿苷和人參皂苷Rb1。
　?。ǘ┙?jīng)滋腎降糖丸治療后大鼠體重較模型組明顯增加，糖代謝得到明顯改善，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);各組脂代謝無明顯差異(P＞0.05)。骨代謝相關(guān)指標(biāo)中血Ca、P升高，尿Ca排出增多，骨吸收指標(biāo)TRACP-5b、CTX-1均升高，骨形成指標(biāo)中BALP、OT/BGP升高，差異有統(tǒng)

6、計學(xué)意義(P＜0.05)，PⅠNP卻無明顯變化(P＞0.05)。
　?。ㄈ┤怼⒀导肮晒枪敲芏让黠@提高。骨硬組織切片結(jié)果提示，經(jīng)滋腎降糖丸不同劑量治療后，骨小梁結(jié)構(gòu)均較模型組明顯改善，以高劑量組改善較明顯。掃描電鏡觀察到經(jīng)滋腎降糖丸高、低劑量治療后骨的微結(jié)構(gòu)均較模型組改善，高劑量組改善明顯。
　?。ㄋ模┮认貶E染色提示治療組胰島結(jié)構(gòu)較模型組明顯改善，胰島大小基本正常，形態(tài)尚規(guī)則，胰島細(xì)胞排列整齊，密度尚可，萎縮變性的胰島

7、細(xì)胞減少。熒光免疫雙標(biāo)顯示經(jīng)滋腎降糖丸治療后α、β細(xì)胞位置分布尚可，兩者比例倒置改善，細(xì)胞核形態(tài)尚規(guī)則;而透射電鏡下胰島細(xì)胞細(xì)胞核形態(tài)較規(guī)則，分泌顆粒增加，線粒體無明顯腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及高爾基體結(jié)構(gòu)尚可。
　　（五）不同組別之間血清代謝物經(jīng)主成分分析、最小偏二乘分析，發(fā)現(xiàn)一些可能與DOP大鼠相關(guān)的特征性代謝產(chǎn)物:乳酸、谷氨酸、β-羥丁酸。對于各差異性代謝產(chǎn)物變化趨勢，模型組與正常組相比，乳酸、β-羥丁酸水平均升高，谷氨酸水平下降。中藥

8、各亞組與模型組比較乳酸、β-羥丁酸水平降低，而谷氨酸水平呈上升趨勢，差異均具有統(tǒng)計意義(P＜0.05)，并呈劑量相關(guān)性，說明這些特征性代謝物可用于滋腎降糖丸療效的評價。
　?。┎煌M別之間尿液中檢測出的代謝物經(jīng)主成分分析、最小偏二乘分析，尿代謝組學(xué)差異性代謝產(chǎn)物為馬尿酸、乳酸、尿囊素、甘氨酸、苯甲酸、琥珀酸、3-硫酸吲哚酚、甲胺、?；撬徇@9種代謝物。對于各差異性代謝產(chǎn)物變化趨勢，模型組與正常組相比，馬尿酸、乳酸、尿囊素、甘氨酸

9、、琥珀酸、3-硫酸吲哚酚、甲胺、?；撬崴浇档?，苯甲酸水平均升高。中藥各亞組與模型組比較馬尿酸、乳酸、甘氨酸、琥珀酸、3-硫酸吲哚酚均呈上升趨勢。
　　結(jié)論:
　　一、臨床研究部分:
　　通過我們的臨床研究發(fā)現(xiàn)，治療組可以明顯降低腎陰虛證證候積分，改善臨床癥狀，改善糖脂代謝，同時可以明顯降低血清SOST水平。進一步的多元線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，病程、HbA1c、LDH-c與血清SOST水平呈正相關(guān)。
　　二、實驗研究部