滋腎降糖丸防治糖尿病骨質(zhì)疏松的臨床及實驗研究.pdf

1、目的：
　　一、臨床研究部分:
　　本部分研究通過對腎陰虧虛的糖尿病骨質(zhì)疏松患者的臨床研究，旨在觀察滋腎降糖丸對該類患者的糖代謝、骨代謝等方面的影響，為滋腎降糖丸防治糖尿病骨質(zhì)疏松提供現(xiàn)代科學(xué)理論依據(jù)。
　　二、實驗研究部分:
　　本部分研究旨在觀察滋腎降糖丸對糖尿病大鼠骨代謝指標(biāo)、骨密度及骨組織形態(tài)的影響及其對Wnt/β-連環(huán)蛋白(catenin)通路的調(diào)控作用，以探討其對糖尿病介導(dǎo)的骨量減少及骨質(zhì)疏松形成的防

2、治作用和可能的分子機制。
　　方法：
　　一、臨床研究部分:
　　選取2015年1月至2015年8月深圳市中醫(yī)院內(nèi)分泌科門診及住院的糖尿病骨質(zhì)疏松腎陰虧虛證患者40例，隨機分為對照組20例，治療組20例。對照組在常規(guī)降糖治療基礎(chǔ)上加服阿侖膦酸鈉。治療組在對照組基礎(chǔ)上加服滋腎降糖丸。療程3個月。觀察治療前后患者中醫(yī)證候積分、骨密度及空腹血糖(Fasting Plasma Glucose，F(xiàn)PG)、空腹胰島素(Fastin

3、g Insulin，F(xiàn)ins)、血鈣、血磷、骨鈣素(Osteocalcin, OC)、β-I型膠原羧基端肽(β-cross-linked c-terminal telopeptide of type1collagen，β-CTX)的變化。
　　二、實驗研究部分:
　　腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)建立糖尿病大鼠模型，隨機分為模型組、中藥組、西藥組，各治療組分別給予相應(yīng)藥物灌胃治療，另設(shè)正常對照組，

4、每組10只。干預(yù)3個月后，觀察各組大鼠骨密度、FPG、Fins、血鈣、血磷、骨源性堿性磷酸酶(Bone Alkaline Phosphatase，B-ALP)、OC、1型前膠原酶N端肽(TotalProcollagen Type1 N-propeptide，P1NP)、β-CTX、骨保護(hù)素(Osteoprotegerin，OPG)的變化。同時用HE染色法觀察各組大鼠骨組織形態(tài)變化，并用實時定量PCR(Quantitation Real-

5、Time PCR，QRT-PCR)方法檢測骨組織Wnt3α、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白-5（Low Density Lipoprotein Peceptor Related Protein-5，LRP-5）、β-catenin、RUNT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runt-Related Transcripttion Factor-2,RUNX-2）、Dickkopf-1（DKK-1）、硬化蛋白(Sclerostin，SOST)基因表達(dá)水平。

6、　　結(jié)果：
　　一、臨床研究部分:
　?。ㄒ唬┲委熀螅委熃M骨密度、Fins、血鈣、血磷及OC較前均明顯升高（P＜0.01），中醫(yī)證候總積分、FPG及β-CTX較前均明顯降低(P＜0.01);
　　（二）治療后，對照組骨密度、Fins、血磷及OC較前均有不同程度升高(P＜0.05，P＜0.01)，F(xiàn)PG及β-CTX較前均有明顯降低(P＜0.01)，中醫(yī)證候總積分無明顯下降（P＞0.05），血鈣無明顯增加（P＞0.05）

7、;
　?。ㄈ﹥山M上述指標(biāo)治療后的比較及治療前后差值的比較均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，并且治療組對上述指標(biāo)的改善程度均優(yōu)于對照組。
　　二、實驗研究部分
　?。ㄒ唬┡c正常組比較，模型組大鼠骨密度、Fins、血鈣、血磷、B-ALP、OC均明顯降低（P＜0.01），F(xiàn)PG、PINP、β-CTX、OPG均明顯升高(P＜0.01);與模型組比較，中藥組和西藥組大鼠骨密度、Fins、血鈣、血磷、B-ALP、O

8、C均明顯升高（P＜0.01），F(xiàn)PG、PINP、β-CTX、OPG均明顯降低(P＜0.01);與西藥組比較，中藥組大鼠Fins、血磷、OC、PINP、OPG均有不同程度升高（P＜0.05，P＜0.01），F(xiàn)PG、β-CTX均明顯降低（P＜0.01），骨密度、血鈣則無明顯差異（P＞0.05）;
　?。ǘ┱＝M大鼠骨小梁排列致密有序，紋理清楚，骨皮質(zhì)厚度正常，未見明顯病理改變;模型組表現(xiàn)為骨小梁結(jié)構(gòu)稀疏、部分?jǐn)嗔眩瑪?shù)目減少，骨皮質(zhì)變

9、薄;中藥組和西藥組骨組織結(jié)構(gòu)紊亂較模型組明顯減輕，基本接近正常;
　?。ㄈ┡c正常組比較，模型組大鼠骨組織Wnt3α、LRP-5、β-catenin及RUNX-2基因表達(dá)量均明顯降低(P＜0.01);與模型組比較，中藥組Wnt3α、LRP-5、β-catenin、RUNX-2基因表達(dá)量均明顯增加(P＜0.01)，西藥組β-catenin、RUNX-2基因表達(dá)量明顯增加(P＜0.01)，Wnt3α、LRP-5基因表達(dá)量則無明顯差異（

10、P＞0.05）;與西藥組比較，中藥組大鼠Wnt3α、LRP-5基因表達(dá)量明顯增加（P＜0.01），β-catenin、RUNX-2基因表達(dá)量則無明顯差異（P＞0.05）;各組大鼠DKK-1及SOST基因表達(dá)量無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　一、臨床研究部分:
　　滋腎降糖丸能明顯改善糖尿病骨質(zhì)疏松患者的臨床癥狀及體征，并且能調(diào)節(jié)患者糖代謝紊亂，減少血清鈣磷流失，進(jìn)而改善骨代謝，促進(jìn)骨形成，抑制骨吸收，提高

11、骨密度。
　　二、實驗研究部分:
　　（一）糖尿病通過下調(diào)Wnt3α、LRP-5、β-catenin及RUNX-2的基因表達(dá)，導(dǎo)致大鼠骨組織Wnt/β-catenin信號通路障礙，從而影響成骨細(xì)胞的形成及分化，最終引起骨形成減少，骨組織形態(tài)遭到破壞，骨密度降低;
　　（二）滋腎降糖丸通過上調(diào)Wnt/β-catenin信號通路中上述重要分子的基因表達(dá)，促進(jìn)成骨細(xì)胞的形成分化，抑制骨破壞，改善骨組織形態(tài)，增加骨密度，調(diào)節(jié)骨