芫花根水提物對肛瘺創(chuàng)面及肛緣腫脹的實驗研究.pdf

1、目的:通過芫花根水提物與空白對照及黃芩油膏對比，外用于大鼠肛瘺術(shù)后及肛緣水腫換藥，觀察創(chuàng)面水腫、炎癥反應(yīng)的變化情況及創(chuàng)面的愈合情況。以此驗證芫花根治療痔瘺疾病的有效性與其抗炎、消腫的藥理作用相關(guān)，并且為芫花根的進一步探索研究提供動物實驗研究基礎(chǔ)。
　　方法:實驗一:在大鼠背上制備肛瘺術(shù)后創(chuàng)面模型，將造模成功的大鼠分成A組（生理鹽水組）、B組（芫花根組）、C組（黃芩油膏組），分別使用生理鹽水、芫花根水提物、黃芩油膏浸泡的紗布給大鼠創(chuàng)

2、面換藥。在用藥3、7、14天時，取各組的創(chuàng)面組織進行HE染色和MASSON染色，觀察肉芽組織變化、炎細胞浸潤情況和纖維化變化，并應(yīng)用PCR定量檢測各組大鼠血清中IL-6、IL-12的表達及使用流式細胞術(shù)檢測各組大鼠外周血中Treg/Th17比例。實驗二:建立大鼠肛門巴豆油腫脹模型，造模成功后，將大鼠分成A組（正常組）、B組（生理鹽水組）、C組（芫花根組）、D組（黃芩油膏組），A組不做任何處理，B、C、D組每隔4、24、48小時分別將生理

3、鹽水、芫花根水提物、黃芩油膏涂于腫脹的肛門處，48.5小時后，取各組大鼠肛周腫脹部位組織進行HE染色和MASSON染色，觀察大鼠肛緣腫脹程度、血管生成情況、炎細胞浸潤情況和纖維化變化，并行免疫組化檢測SM22α蛋白的表達，免疫熒光染色定位SM22α蛋白，以及應(yīng)用PCR和ELISA方法檢測各組大鼠血清中IL-17和TNF-α的表達情況。數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0分析。
　　結(jié)果:實驗一中，PCR定量檢測結(jié)果顯示:用藥3天后，A、B、

4、C組IL-12的表達量用(X)±S表示分別為1.02±0.28、2.52±1.01、2.78±1.83，經(jīng)統(tǒng)計分析存在顯著性差異，P＜0.05(P=0.011)，而B、C組對比，統(tǒng)計學(xué)上無明顯差異，P＞0.05(P=0.648)。三組中IL-6表達量用(X)±S表示分別為1.04±0.46、0.84±0.29、0.69±0.33，P＞0.05(P=0.157)，無統(tǒng)計學(xué)差異。用藥7天后，三組IL-12的表達量分別為0.80±0.24、2

5、.75±1.13、3.02±2.21，經(jīng)統(tǒng)計分析存在顯著性差，P＜0.05(P=0.006)，而B、C組對比，無明顯差異，P＞0.05(P=0.700)。三組中IL-6表達量分別為1.86±0.56、0.62±0.21、0.53±0.23，經(jīng)統(tǒng)計分析存在顯著性差異，P＞0.05，而B、C組對比，則無明顯差異。P＞0.05(P=0.589)。用藥14天后，三組IL-12的表達量分別為0.49±0.21、3.48±1.45、4.19±1.4

6、8，經(jīng)統(tǒng)計分析存在顯著性差異，P＜0.05，而B、C組對比，則無明顯差異，P＞0.05(P=0.237)。三組中IL-6表達量分別為2.84±0.99、0.49±0.23、0.31±0.14，經(jīng)統(tǒng)計分析存在顯著性差異，P＞0.05，而B、C組對比，則無明顯差異P＞0.05(P=0.516)。HE染色顯示:用藥3天后A、B、C三組均有纖維脂肪組織中見大量急慢性炎細胞浸潤，局部肌肉組織變性壞死，血管增生，管壁增厚，A組中還見間質(zhì)水腫和血管閉

7、塞，說明A組炎癥表現(xiàn)更重，B、C較A組稍輕，兩組炎癥程度相當(dāng)。用藥7天后三組纖維脂肪組織中仍有大量急慢性炎細胞浸潤，A、C組局部肌肉組織變性壞死、鈣化，B、C組局部有肉芽組織形成，說明B、C組創(chuàng)面開始修復(fù)。用藥14天后B、C組組織中炎細胞浸潤較A組明顯減少，且有玻璃樣改變，說明創(chuàng)面開始有瘢痕組織形成。Masson染色顯示:用藥3天后創(chuàng)面組織中見大量粘液及有膠原纖維生成，并且B、C組中多于A組。用藥7天后創(chuàng)面組織中膠原纖維增多，且B、C組

8、比A組多。用藥14天后A組創(chuàng)面組織中膠原纖維增減少B、C組中膠原纖維增多。流式細胞術(shù)檢測外周血Treg/Th17比例的結(jié)果用(X)±S表示為:用藥3天后，A、B、C組分別是0.663±0.042、0.770±0.009、0.926±0.002，經(jīng)統(tǒng)計分析存在顯著性差異，P＜0.05(P=0.004)。用藥7天后，分別是0.565±0.001、1.077±0.033、1.372±0.065，經(jīng)統(tǒng)計分析存在顯著性差異，P＜0.05(P=0.

9、001)。用藥14天后，分別是0.295±0.011、1.722±0.074、2.362±0.187，經(jīng)統(tǒng)計分析存在顯著性差異，P＜0.05(P=0.001)。
　　實驗二中，PCR定量檢測TNF-α及IL-17指標(biāo)的結(jié)果顯示:A、B、C、D四組中TNF-α的表達量以(X)±S表示分別為0.88±0.21、5.03±1.31、2.63±0.96、1.57±0.27，P＜0.05，存在顯著差異，而C、D組對比，統(tǒng)計學(xué)上無明顯差異，P

10、＞0.05(P=0.073)。四組中IL-17表達量為0.92±0.26、3.37±0.85、2.15±0.45、1.48±0.39，經(jīng)統(tǒng)計分析存在顯著性差異，P＜0.05，而C、D組對比，統(tǒng)計學(xué)上無明顯差異，P＞0.05(P=0.072)。ELISA定量檢測TNF-α及IL-17指標(biāo)的結(jié)果與PCR檢測結(jié)果相符，P值均小于0.05，存在顯著性差異。HE染色示:A組見正常的肛周粘膜、肌肉等組織。B、C、D組的肛周粘膜、肌肉組織中均見急慢性

11、炎細胞浸潤，C、D組較A組少，C組較D炎細胞浸潤更少，且C組中未見肌肉組織壞死，并伴有小血管增生，說明C、D組用藥后較A組炎癥性水腫消退，且C組炎癥、水腫程度最輕。MASSON染色觀察肛緣纖維化程度的結(jié)果為:A組中見正常肛緣組織，B組見大量粘液及膠原纖維生成，C組和D組經(jīng)藥物治療后見少量粘液及膠原纖維生成。免疫組化檢測SM22α蛋白的表達用IOD值表示結(jié)果，A、B、C、D分別為8841.39±49841.88、4339.75±24700

12、.33、7211.28±29230.33、7702.81±39702.19，四組經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，有顯著性差異，P＜0.05，但是C、D兩組比較，統(tǒng)計學(xué)上無明顯差異，P＞0.05(P=0.166)。免疫熒光染色顯示:SM22α蛋白及STIM1蛋白位于細胞質(zhì)內(nèi)，紅色熒光位于細胞核中，所以O(shè)rai1蛋白位于細胞質(zhì)中。
　　結(jié)論:芫花根水提物具有減輕痔瘺術(shù)后炎癥反應(yīng)、術(shù)后水腫的作用。在創(chuàng)面愈合的早中期減少炎細胞滲出，增加膠原纖維產(chǎn)生，提高S