重組免疫融合肽Tα1-BP5對鴨坦布蘇病毒滅活疫苗的免疫增強作用.pdf

1、鴨坦布蘇病毒（Duck tembusu virus, DTMUV）是一種新型黃病毒。該病毒感染鴨后以產(chǎn)蛋量急劇降低為主要特征，發(fā)病范圍廣、傳播迅速，發(fā)病前期為長時間的高度發(fā)熱，發(fā)病后期會出現(xiàn)一定比例的神經(jīng)癥狀，主要表現(xiàn)為站立不穩(wěn)、癱軟及運動失調(diào)等，有些甚至在數(shù)日內(nèi)迅速死亡。目前，關(guān)于該病的預(yù)防措施主要通過鴨坦布蘇病毒滅活疫苗進行免疫接種，但滅活疫苗的免疫效果仍需進一步完善，該病的防控仍需加強。本研究通過噬菌體展示技術(shù)以 DTMUV HN

2、1株 E蛋白作為標(biāo)靶篩選出2條能與DTMUV HN1株E蛋白特異性結(jié)合的多肽，并檢測了其對 DTMUV的抑制作用；同時利用基因工程技術(shù)制備了重組融合肽 Tα1-BP5（rTα1-BP5），初步檢測了該融合肽的免疫增強作用；最后以 rTα1-BP5配合鴨坦布蘇病毒滅活疫苗免疫雛鴨，對免疫后雛鴨的免疫效力進行分析，以期為鴨坦布蘇病毒病的防控奠定基礎(chǔ)。試驗主要內(nèi)容分為以下三個方面：
　　1．DTMUV HN1株囊膜E蛋白抑制肽的篩選及鑒

3、定
　　利用噬菌體展示技術(shù)將DTMUV HN1株E蛋白作為靶標(biāo)，篩選出2條能與DTMUV HN1株 E蛋白特異性結(jié)合的多肽 P3-12：HWSTRQGSTRWN和 P8-12：THRSWQGNSWYM，然后分析E蛋白結(jié)合肽P3-12和P8-12對DTMUV在鴨胚成纖維細(xì)胞增殖方面的影響，結(jié)果顯示， E蛋白抑制肽 P3-12和 P8-12本身對鴨胚成纖維細(xì)胞的增殖無明顯影響，不同濃度的的抑制肽P3-12和P8-12均能顯著降低 DT

4、MUV在鴨胚成纖維細(xì)胞中的病毒滴度和病毒拷貝數(shù)。本試驗為進一步探明鴨坦布蘇病毒與宿主的相互作用及抗病毒制劑的開發(fā)提供依據(jù)。
　　2．rTα1-BP5的構(gòu)建表達(dá)及其佐劑特性檢測
　　通過基因工程技術(shù)表達(dá) rTα1-BP5，并采用 MTT法檢測其表達(dá)產(chǎn)物的體外活性。將 rTα1-BP5與 H9N2型 AIV滅活疫苗聯(lián)合免疫，并設(shè)立4個試驗組與PBS對照組。分別測定不同組中小鼠禽流感(Avian influenza virus，A

5、IV)不同時期HI抗體效價、H9N2型AIV抗體亞型含量、血清中IL-4和IFN-γ的含量和動物攻毒試驗，結(jié)果顯示，滅活疫苗+rTα1-BP5組的HI抗體效價與IgG1和IgG2a的抗體含量與血清中 IL-4和 IFN-γ均高于其他組差異顯著，在攻毒后滅活疫苗+rTα1-BP5組小鼠肺臟中病毒滴度明顯下降且與其他組相比差異極顯著，并且在第7 d在小鼠的肺臟中幾乎檢測不到病毒滴度。說明 rTα1-BP5具有良好的免疫佐劑的潛能，本研究為新

6、型疫苗佐劑的研究開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
　　3．rTα1-BP5對鴨坦布蘇病毒滅活疫苗免疫效果增強作用
　　將重組融合肽 Tα1-BP5配合鴨坦布蘇病毒滅活疫苗免疫雛鴨，通過檢測鴨
　　體內(nèi)血清IgG抗體、血清細(xì)胞因子水平、動物攻毒保護試驗及HE染色來評價重組融合肽 Tα1-BP5對鴨坦布蘇病毒滅活疫苗的免疫增強作用。結(jié)果顯示，疫苗組雛鴨血清 IgG抗體、細(xì)胞因子（IL-4、IFN-γ）水平均顯著高于對照組與單純疫苗組。動物