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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.觀察防己黃芪湯對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響;
2.觀察防己黃芪湯對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中炎癥因子MCP-1、IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)的影響。
方法:
體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞,在細(xì)胞融合后2天,用傳統(tǒng)“雞尾酒”法(即含胰島素、地塞米松、異丁基-3-甲基黃嘌呤的混合誘導(dǎo)劑)誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞。在誘導(dǎo)分化的第0天,設(shè)置溶媒對(duì)照組(
2、1 mol/L PBS)和藥物處理組(100μg/ml防己黃芪湯)。
1.在成功誘導(dǎo)分化的第10天,用油紅O染色,拍照觀察,用異丙醇溶解油紅O,使用酶標(biāo)儀進(jìn)行定量檢測(cè)各組A492nm以間接反映3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化程度及細(xì)胞內(nèi)甘油三酯小脂滴含量。
2.在成功誘導(dǎo)分化的第10天,提取細(xì)胞總RNA,采用real-time PCR法檢測(cè)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因,過(guò)氧化物酶體增殖受體γ(PPARγ)、脂聯(lián)素(a
3、diponectin) mRNA的表達(dá)情況。
3.在成功誘導(dǎo)分化的第10天,提取細(xì)胞總RNA,采用real-time PCR法檢測(cè)3T3-L1脂肪細(xì)胞炎癥因子,MCP-1、IL-6、TNF-αmRNA的表達(dá)情況。
結(jié)果:
1.油紅O染色顯示藥物處理組(100μg/ml防己黃芪湯)中含有甘油三酯小脂滴的成熟脂肪細(xì)胞少于溶媒對(duì)照組(1 mol/L PBS),P<0.05。
2.在誘導(dǎo)分化的第10天,藥
4、物處理組(100μg/ml防己黃芪湯)的PPARγmRNA(P<0.005)、脂聯(lián)素mRNA(P<0.005)明顯低于溶媒對(duì)照組(1 mol/L PBS)。
3.在誘導(dǎo)分化的第10天,藥物處理組(100μg/ml防己黃芪湯)的MCP-1 mRNA(P<0.05)、TNF-αmRNA(P<0.005)明顯低于溶媒對(duì)照組(1 mol/L PBS),IL-6 mRNA表達(dá)兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論:
1.通過(guò)定性分
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