白藜蘆醇對3T3-L1前脂肪細胞成脂分化以及TNF-α誘導的脂肪因子表達的影響.pdf

1、目的：(1)觀察白藜蘆醇對3T3-L1前脂肪細胞成脂分化的影響；(2)探討白藜蘆醇對腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導的脂肪因子表達的影響及其機制。 方法：(1)通過CCK-8法檢測Sirtl激動劑-白藜蘆醇對3T3-L1細胞增殖活力影響，油紅O染色法、甘油三酯GPO-POD酶法測定白藜蘆醇對3T3-L1細胞脂肪含量增長的影響情況，借助于甘油含量測定試劑盒檢測3T3-L1脂肪細胞脂質分解的情況；(2)分別以不同濃度白藜蘆醇、核因

2、子-κB(NF-κB)的抑制劑-BAYll-7082或Sirtl抑制劑-Sirtinol和TNF-α共同處理成熟3T3-L1脂肪細胞，用定量PCR技術、ELISA技術檢測各條件下白介素-6(IL-6)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)以及脂聯(lián)素基因轉錄、蛋白分泌情況；(3)分別以不同濃度白藜蘆醇或Sirtinol和TNF-α共同處理轉染含IL-6、MCP-1啟動子的熒光素酶報告質粒的HEK293細胞，通過熒光素酶基因報告技術檢測各組的

3、熒光素酶活性；(4)TNF-α(10ng/ml)處理表達質粒(pcDNA-Sirtl或pCMV-IκBa)與熒光素酶報告質粒共轉染的HEK293細胞，通過熒光素酶報告技術檢測各組的熒光素酶活性；(5)以不同濃度白藜蘆醇和TNF-α共同處理成熟3T3-L1脂肪細胞1h，通過凝膠電泳遷移率檢測(EMSA)技術檢測各組細胞核NF-κB的DNA結合能力；(6)TNF-α(10ng/ml)處理分別轉染pcDNA-Sirt1或pcDNA3.1/my

4、c-His B的HEK293細胞，通過EMSA技術檢測各組NF-κB的DNA結合能力。 結果：(1)白藜蘆醇(0～100μM)以劑量、時間依賴方式抑制3T3-L1前脂肪細胞的生長，當濃度>50μM時，白藜蘆醇引起分化中期及分化成熟的3T3-L1脂肪細胞的活力下降；此外，白藜蘆醇以劑量依賴方式阻止細胞分化過程中細胞內的脂肪含量聚積，但對脂肪分解無明顯影響；(2)白藜蘆醇以劑量依賴的方式減弱TNF-αc對3T3-L1脂肪細胞IL-6

5、、MCP-1以及脂聯(lián)素的基因轉錄、蛋白分泌的影響；BAY11-7082阻止、而Sirtinol增強TNF-α對IL-6、MCP-1基因轉錄的上調作用；(3)白藜蘆醇減弱、而Sirtinol增強TNF-α誘導的IL-6、MCP-1啟動子活性；(4)過表達NF-κB抑制蛋白α(IκBα)可以抑制TNF-α誘導的IL-6、MCP-1啟動子的轉錄活性；(5)過表達Sirt1可以抑制TNF-α誘導的NF-κB依賴的轉錄活性，但不影響NF-KB的D