黔產(chǎn)莪術(shù)油成分分析及其對(duì)直腸癌SW1463細(xì)胞株凋亡因子的影響研究.pdf

1、目的：利用GC-MS法分析比較四種炮制品的黔產(chǎn)莪術(shù)中揮發(fā)油含量及其化學(xué)成分的差別，確定黔產(chǎn)莪術(shù)油中所含的主要成分，并比較四者所含化學(xué)成分的異同；研究莪術(shù)油對(duì)直腸癌SW1463細(xì)胞株的增殖抑制作用，并探討其對(duì)直腸癌SW1463細(xì)胞株抑制作用的可能機(jī)制。
　　方法：通過(guò)水蒸氣蒸餾法提取不同炮制類(lèi)型的黔產(chǎn)莪術(shù)飲片中揮發(fā)油類(lèi)成分，采用GC-MS法對(duì)黔產(chǎn)莪術(shù)油的化學(xué)成分進(jìn)行分析，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)檢索分析計(jì)算，確定黔產(chǎn)莪術(shù)揮發(fā)油中所含的主要成分。

2、將經(jīng)水蒸氣蒸餾提取的莪術(shù)揮發(fā)油，配制成40、80、120、160、200、240、280 mg·L-1等梯度濃度，采用四氮唑鹽（MTT）比色法檢測(cè)不同濃度莪術(shù)油干預(yù)直腸癌SW1463細(xì)胞24、48、72h后對(duì)細(xì)胞增殖抑制的影響，計(jì)算莪術(shù)油對(duì)細(xì)胞的抑制率及IC50；根據(jù)藥物的IC50設(shè)定濃度為80，120，160，200 mg·L-1的梯度劑量組干預(yù)細(xì)胞24h，采用倒置顯微鏡觀察不同濃度莪術(shù)油對(duì)直腸癌SW1463細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響，Giem

3、sa染色法觀察莪術(shù)油對(duì) SW1463細(xì)胞增殖凋亡形態(tài)學(xué)的影響；采用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)莪術(shù)油對(duì)直腸癌細(xì)胞內(nèi)Capase-3，Bax與Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：從4種莪術(shù)飲片中共檢測(cè)出78種化學(xué)成分，其中鮮品莪術(shù)揮發(fā)油中有58個(gè)化學(xué)成分，生切飲片揮發(fā)油中有53個(gè)化學(xué)成分，蒸制飲片揮發(fā)油中有52個(gè)化學(xué)成分，醋炙莪術(shù)揮發(fā)油中有51個(gè)化學(xué)成分。揮發(fā)油中的主要成分為單萜和倍半萜類(lèi)，但是不同炮制法制備的黔

4、產(chǎn)莪術(shù)中揮發(fā)油的含量及其成分組成存在較大的差異。MTT比色法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)莪術(shù)油對(duì)SW1463細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，并呈一定的時(shí)間-劑量依賴(lài)性，24 h、48 h和72 h的半數(shù)抑制率(IC50)分別為144.33、134.11、120.04 mg·L-1；Giemsa染色可見(jiàn)細(xì)胞明顯的凋亡形態(tài)學(xué)特征；Western blot表明，莪術(shù)油干預(yù)SW1463細(xì)胞株24 h后，與陰性對(duì)照組比較，Caspase-3、Bax的蛋白表達(dá)上調(diào)(P﹤0.

5、05，P﹤0.05)，Bcl-2的蛋白表達(dá)下調(diào)(P﹤0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：1.黔產(chǎn)莪術(shù)油的主要成分為單萜和倍半萜類(lèi)，不同炮制法制備的黔產(chǎn)莪術(shù)揮發(fā)油的含量及其成分組成存在較大差異。2.不同濃度的黔產(chǎn)莪術(shù)油對(duì)直腸癌SW1463細(xì)胞增殖有一定的抑制作用，且隨著時(shí)間的增長(zhǎng)及濃度增高而增強(qiáng)，呈一定的時(shí)間-劑量依賴(lài)性。3.黔產(chǎn)莪術(shù)油可明顯抑制直腸癌 SW1463細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與上調(diào)Caspase-3和B