海帶硫酸多糖對人大腸癌Lovo細胞株增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：大腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。近年來，盡管手術、放療、化療等綜合治療使大腸癌患者的術后生存得到了很大的改善，但療效并不樂觀。大腸癌患者早期常無明顯癥狀，多數(shù)患者就診時即己為中、晚期，還有15％-35％就診時就已發(fā)生轉(zhuǎn)移，而腫瘤轉(zhuǎn)移是導致腫瘤患者死亡的重要原因之一。海帶硫酸多糖(Laminaria polysaccharidesulfate，LPS)是一種含有多種單糖和硫酸基的水溶性雜多糖，其生物學功能主

2、要集中在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、血脂及血糖調(diào)節(jié)等方面。海帶硫酸多糖從海帶中提取，我國是海帶(Laminaria japonica)生產(chǎn)大國，海帶產(chǎn)量占世界產(chǎn)量一半，具有良好的開發(fā)應用前景。而海帶是食藥兩用的褐藻類植物，其藥用價值在本草綱目和嘉佑本草等古醫(yī)書中已有記載。原材料易得，提取方法多種。Vlodavsky[3]等報道海帶硫酸多糖作為乙酰肝素酶抑制劑在動物實驗中能夠有效的抑制腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移。有文獻報道，體內(nèi)、外實驗證實LPS具有抑制腫瘤細

3、胞增殖的作用，但其分子機制未見報道，本項目從LPS促進細胞凋亡，進而抑制細胞增殖及提高化療藥物的敏感性著手研究LPS的藥物作用機理。bcl-2是抗凋亡基因，且與腫瘤的發(fā)展密切相關。它通過其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物bcl-2基因蛋白，參與細胞內(nèi)抗氧化作用和抑制鈣離子跨膜運動而調(diào)控細胞凋亡。NF-κBp65是一種重要的可誘導的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，參與炎癥、免疫、細胞的增殖和細胞凋亡等多種生理、病理過程的基因調(diào)控。近年來發(fā)現(xiàn)NF-κBp65調(diào)節(jié)許多黏附、侵襲、

4、遷移相關因子的轉(zhuǎn)錄而參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，故降低NF-κBp65的表達將成為治療癌癥的新靶點。通過分析細胞周期變化及檢測bcl-2基因和NF-κBp65基因表達的變化，觀察海帶硫酸多糖抗腫瘤的機制，即海帶硫酸多糖通過抑制乙酰肝素酶的活性，從而抑制腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移的機制。它與化療藥物聯(lián)合應用，增強了腫瘤細胞對化療藥物的敏感性，可減少藥物的用量，提高腫瘤患者的治愈率和生存質(zhì)量。 方法：本研究以不同濃度的LPS處理大腸癌Lovo細胞

5、，用四甲基偶氮藍比色法(MTT)測定細胞增殖情況，細胞染色法觀察細胞凋亡的形態(tài)，用流式細胞儀記錄細胞周期改變、bcl-2及NF-κBp65基因表達情況，從而探討海帶硫酸多糖對人大腸癌Lovo細胞株的體外生長、凋亡及細胞周期的影響，并進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果： 1.形態(tài)學觀察：掃描鏡下觀察實驗組及對照組：對照組細胞生長活躍，大小不等，細胞間有很多微絲樣的結(jié)構互相連接。實驗組的細胞形態(tài)變化較大，較多細胞變性及壞死，細胞由梭形變

6、為圓形，表面形成許多小泡形的凋亡小體。 2.LPS對Lovo細胞的抑制率：MTT比色法檢測LPS對Lovo細胞的增殖的抑制作用，從結(jié)果可見LPS對Lovo細胞具有較強的抑制作用，隨著濃度增加與時間延長該抑制作用漸增強，呈劑量時效依賴關系，其間差異具統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 3.細胞周期變化：實驗組的細胞用碘化丙錠染色后，用流式細胞儀分析細胞周期，發(fā)現(xiàn)LPS可改變Lovo細胞的細胞周期，三種濃度S期細胞百分率增加，G0

7、/G1期細胞百分率降低，細胞被阻滯于S期，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 4.bc1-2與NF-κBp65基因表達的改變：Lovo細胞有bc1-2高表達，LPS可降低細胞中的bc1-2基因蛋白的表達，且隨著LPS濃度的增加，改變愈加明顯。LPS作用后，Lovo細胞內(nèi)NF-κBp65的表達降低，隨著LPS濃度的增加，降低愈明顯，實驗組與對照組比較及實驗組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論： 1.硫酸海帶