SOX2與Wnt-β-catenin信號通路對結(jié)直腸癌SW620細胞株上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用.pdf

1、目的：通過慢病毒介導(dǎo)的基因干涉技術(shù)沉默結(jié)直腸癌細胞株 SW620中 SOX2 mRNA的表達，探討 SOX2、Wnt/β-catenin信號通路在結(jié)直腸癌細胞 EMT發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機理和相互間的關(guān)系。
　　方法：采用包裝好的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染 SW620癌細胞后篩選耐藥菌株進行擴大培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡下分別觀察基因干涉組及陰性對照組細胞的細胞形態(tài)變化及劃痕實驗中的細胞遷移能力，應(yīng)用RT-PCR和Western Blot方法分別

2、檢測兩組細胞中SOX2、β-catenin、E-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白質(zhì)的表達。
　　結(jié)果：1細胞形態(tài)學(xué)觀察：與陰性對照組相比較，基因干擾組 SW620癌細胞的形狀由長梭形向圓形、卵圓形過渡，細胞偽足伸出減少或者消失，細胞間距減小、密度增加。2劃痕實驗：與陰性對照組細胞比較，基因干擾組細胞的運動能力減弱，遷移至劃痕中央處的細胞少。3 RT-PCR：基因干擾組 SOX2、β-catenin和Vimenti

3、n mRNA的相對表達量分別為0.25±0.04、0.20±0.03、0.19±0.03，上述三種因子的相對表達量明顯低于對照組的相對表達量0.72±0.06、0.71±0.05、0.65±0.05，而 E-cadherin mRNA的相對表達量為0.87±0.04，表達明顯高于對照組的相對表達量0.31±0.04，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。對四種因子的mRNA的表達情況進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示：SOX2 mRNA和β-cat

4、enin mRNA表達呈正相關(guān)（R＝0.910，P＝0.012），SOX2 mRNA和Vimentin mRNA表達呈正相關(guān)（R＝0.829，P＝0.042），SOX2 mRNA和E-cadherin mRNA表達呈負相關(guān)（R＝-0.841，P＝0.036），β-catenin mRNA和Vimentin mRNA表達呈正相關(guān)（R＝0.886，P＝0.019)，β-catenin mRNA與 E-cadherin mRNA表達呈負相關(guān)(

5、R＝-0.899，P＝0.015)。4 Westen blot：基因干擾組 SOX2蛋白、β-catenin蛋白和Vimentin蛋白的相對表達量分別為0.33±0.02、0.18±0.02、0.29±0.02，三種因子的相對表達量相對于對照組三種因子的相對表達量0.68±0.06、0.70±0.04、0.65±0.04均明顯降低，E-cadherin蛋白的相對表達量為0.78±0.02，表達明顯高于對照組的相對表達量0.31±0.03

6、，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。對四種因子在蛋白層面的表達進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示：SOX2蛋白和β-catenin蛋白表達呈正相關(guān)(R＝0.841，P＝0.036)，SOX2蛋白和Vimentin蛋白表達呈正相關(guān)(R＝0.829，P＝0.042)，SOX2蛋白和E-cadherin蛋白表達呈負相關(guān)(R＝-0.928，P＝0.008)，β-catenin蛋白和Vimentin蛋白表達呈正相關(guān)(R＝0.844，P＝0.034)，β-