FZD2調控肝細胞癌擬態(tài)血管形成和腫瘤干細胞特性的初步研究.pdf

1、肝細胞癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，新型治療方法逐步增多，但根治性手術和肝移植仍是主要治療手段，其高復發(fā)率和高死亡率仍然為得到明顯改善。卷曲蛋白2（frizzled2，FZD2）是一種新近發(fā)現的腫瘤相關分子，它高表達于多種惡性腫瘤，參與調節(jié)腫瘤的生物學行為，影響腫瘤患者的預后，有望成為肝細胞癌的治療靶點。本文旨在探究FZD2與上皮-間質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）、擬態(tài)血管形成(va

2、sculogenic mimicry，VM)以及腫瘤干細胞(cancer stem cells，CSCs)特性三方面的關系，將有助于闡明肝細胞癌的轉移復發(fā)機制，為患者的早期診斷、靶向治療以及預后改善研究提供理論基礎。
　　1、FZD2在肝細胞癌組織中的表達及其臨床意義
　　我們采用熒光定量PCR和免疫組化染色分別從基因轉錄水平和蛋白水平檢測100例肝細胞癌患者癌組織和癌旁組織FZD2的表達水平，發(fā)現其在癌組織的表達量顯著高于

3、癌旁組織(P＜0.05);統(tǒng)計學分析表明，FZD2表達量與腫瘤大小、病理分化程度、微癌栓、TNM分期、BCLC分期、轉移以及早期復發(fā)等多種病理參數有關(P＜0.05);生存分析顯示，FZD2高表達的患者術后無瘤生存時間和總生存時間明顯縮短（P＜0.05），提示FZD2可能是肝細胞癌潛在的預后指標。
　　2、FZD2調控肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力
　　為了探究FZD2在肝細胞癌中的促癌作用，我們分別構建siRNA瞬轉FZD

4、2低表達肝癌細胞模型和慢病毒穩(wěn)轉FZD2過表達細胞模型，采用CCK-8法、平板克隆形成法、流式細胞儀、Transwell法以及Western blot檢測發(fā)現，敲低FZD2表達抑制肝癌細胞增殖、遷移侵襲能力以及EMT進程，誘導肝癌細胞凋亡，而過表達FZD2則促進細胞增殖、遷移侵襲以及EMT特性;采用FZD2低表達穩(wěn)轉細胞株構建裸鼠皮下移植瘤模型證實，FZD2也可以調控肝癌細胞體內增殖能力和EMT進程。
　　3、FZD2調控肝細胞癌

5、的VM形成能力
　　VM是肝細胞癌轉移復發(fā)的危險因素，其與FZD2的關系尚未明確。我們采用CD34/PAS雙染法觀察肝細胞癌和裸鼠移植瘤組織VM的表達情況，發(fā)現FZD2與VM表達呈正相關(P＜0.05);細胞三維培養(yǎng)條件下，敲低FZD2抑制肝癌細胞的成管能力，而過表達FZD2則增強這種能力，提示FZD2介導肝細胞癌VM形成。
　　4、FZD2調控肝癌細胞的CSCs特性
　　除VM外，CSCs特性也與肝細胞癌轉移復發(fā)密切

6、相關。流式細胞儀檢測到，敲低FZD2表達后肝癌細胞干細胞亞群CD44(+)細胞減少(P＜0.05)，Western blot和免疫組化染色進一步證明，肝癌細胞和移植瘤組織中CSCs轉錄因子Nanog和SOX2表達下調，而過表達FZD2上調肝癌細胞上述干細胞表型。因此，FZD2參與調節(jié)肝癌細胞CSCs特性。
　　結論:
　　FZD2可能通過調控EMT、VM以及CSCs特性促進肝細胞癌的轉移復發(fā)，有望成為肝細胞癌新的預測指標和治