干細(xì)胞因子NANOG、SOX2在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其調(diào)控肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制.pdf

1、肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)死亡率高居惡性腫瘤死亡率的第三位。轉(zhuǎn)移是影響肝癌患者預(yù)后的主要因素，而揭示其分子機(jī)制是從根本上提高臨床治療效果、延長(zhǎng)患者壽命的關(guān)鍵。干性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NANOG和SOX2迄今已被報(bào)道在多種惡性腫瘤中異常高表達(dá)，但對(duì)其與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系及其調(diào)節(jié)作用的分子基礎(chǔ)尚無(wú)詳盡的研究報(bào)告。我們的研究通過(guò)全面的體外、體內(nèi)功能分析及臨床樣本驗(yàn)證，明確NANOG和SOX2通過(guò)調(diào)控上皮間質(zhì)

2、轉(zhuǎn)化(EMT)促進(jìn)肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用，并進(jìn)一步對(duì)其中的信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制進(jìn)行深入解析。本課題從一個(gè)新的角度揭示肝癌轉(zhuǎn)移的分子調(diào)控機(jī)制，為今后肝癌轉(zhuǎn)移靶向治療提供依據(jù)。
　　第一部分
　　NANOG對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其分子機(jī)制研究
　　干性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NANOG迄今已被報(bào)道在多種惡性腫瘤中異常高表達(dá)。在這部分內(nèi)容中，我們通過(guò)免疫組化(IHC)檢測(cè)一組HCC組織樣本中NANOG的表達(dá)水平，并分析其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性

3、。結(jié)果顯示NANOG的表達(dá)水平與是否發(fā)生轉(zhuǎn)移以及生存期有關(guān)。我們發(fā)現(xiàn)NANOG過(guò)表達(dá)會(huì)激活HCC細(xì)胞的EMT，并提高其侵襲、軟瓊脂克隆、腫瘤球形成、抗索拉菲尼以及體內(nèi)成瘤和轉(zhuǎn)移能力。SB-431542是活化素受體樣激酶(ALK)受體拮抗劑，可以抑制細(xì)胞的EMT。我們用SB-431542處理過(guò)表達(dá)NANOG的HCC細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞EMT被抑制，同時(shí)細(xì)胞Matrigel小室侵襲能力也下降。我們發(fā)現(xiàn)NANOG可以通過(guò)轉(zhuǎn)錄調(diào)控，直接激活轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)

4、因子TGF-β超家族成員NODAL及其相互作用蛋白CRIPTO-1，從而激活TGF-β信號(hào)通路，上調(diào)SNAIL表達(dá)水平，啟動(dòng)肝癌細(xì)胞EMT。NODAL啟動(dòng)子區(qū)域的兩個(gè)NANOG結(jié)合位點(diǎn)在NANOG對(duì)NODAL的轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起關(guān)鍵作用。我們還發(fā)現(xiàn)，NANOG在HCC組織中的表達(dá)水平與NODAL、磷酸化SMAD3(P-SMAD3)以及SNAIL的表達(dá)水平正相關(guān)，聯(lián)合NANOG和P-SMAD3可以指示肝癌預(yù)后。另外，腫瘤邊緣區(qū)域的NANOG表達(dá)

5、水平高于腫瘤內(nèi)部的NANOG表達(dá)水平。這些結(jié)果展示了NANOG調(diào)控HCC轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，提示了NANOG作為HCC預(yù)后標(biāo)志物及藥物靶點(diǎn)的潛在價(jià)值。
　　第二部分
　　SOX2對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其分子機(jī)制研究
　　干性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子SOX2迄今已被報(bào)道在多種惡性腫瘤中異常高表達(dá)。在這部分內(nèi)容中，我們通過(guò)IHC檢測(cè)一組HCC組織樣本中SOX2的表達(dá)水平，并分析其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果顯示SOX2的表達(dá)水平與是否發(fā)

6、生轉(zhuǎn)移以及生存期有關(guān)。我們發(fā)現(xiàn)SOX2過(guò)表達(dá)會(huì)激活HCC細(xì)胞的EMT，并提高其侵襲、軟瓊脂克隆和腫瘤球形成的能力。另外，SOX2可以激活SLUG啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性，上調(diào)SLUG的表達(dá)水平，從而啟動(dòng)EMT，調(diào)控HCC細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。這些結(jié)果展示了SOX2調(diào)控HCC細(xì)胞轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，提示了SOX2作為HCC預(yù)后標(biāo)志物及藥物靶點(diǎn)的潛在價(jià)值。
　　結(jié)論：
　　1.NANOG和SOX2的表達(dá)在轉(zhuǎn)移性HCC細(xì)胞系及組織樣本中上調(diào)，并且

7、與HCC病人生存期相關(guān)，提示了其作為HCC預(yù)后標(biāo)志物的潛在價(jià)值。
　　2.NANOG和SOX2增強(qiáng)HCC細(xì)胞的干細(xì)胞特征，并通過(guò)啟動(dòng)HCC細(xì)胞的EMT上調(diào)其侵襲轉(zhuǎn)移能力。
　　3.NANOG和SOX2分別激活NODAL和SLUG啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性在其對(duì)HCC細(xì)胞EMT及侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控中其重要作用。
　　潛在應(yīng)用價(jià)值：
　　本課題提示了NANOG和SOX2作為HCC預(yù)后標(biāo)志物及藥物靶點(diǎn)的潛在價(jià)值。
　　創(chuàng)新點(diǎn)：