弓形蟲Toxofilin DNA疫苗結(jié)合鋁鹽與脂質(zhì)體A復(fù)合佐劑增強(qiáng)了小鼠的保護(hù)免疫性.pdf

1、目的:剛地弓形蟲疾病在全世界范圍內(nèi)普遍流行，對人類的身體狀況造成了嚴(yán)重的傷害。因此，研制弓形蟲疫苗治療弓形蟲疾病迫在眉睫。本實(shí)驗(yàn)研究目的主要是評估弓形蟲肌動蛋白結(jié)合蛋白(Toxofilin)基因疫苗對小鼠的免疫效果。此外，我們分別將單佐劑(鋁鹽佐劑(alum)，脂質(zhì)體A(MPLA))，雙佐劑(alum+MPLA)分別與Toxofilin DNA疫苗聯(lián)合使用注入到宿主體內(nèi)從而進(jìn)行篩選宿主抗體表達(dá)能力。
　　方法:使用生物信息學(xué)的方法

2、，我們分析了Toxofilin表達(dá)蛋白的氨基酸排列序列，并且運(yùn)用相關(guān)生物學(xué)軟件預(yù)測了Toxofilin蛋白幾個潛在的B細(xì)胞，T細(xì)胞抗原表位。將BALB/c小鼠分為四個實(shí)驗(yàn)組（單Toxofilin DNA疫苗，alum佐劑+DNA疫苗，MPLA佐劑+DNA疫苗，雙佐劑（alum+MPLA）+DNA疫苗），并且將上述四組實(shí)驗(yàn)試劑連續(xù)免疫小鼠三次，通過檢測弓形蟲總抗體以及細(xì)胞因子的含量來評價小鼠產(chǎn)生的免疫反應(yīng)。待第三次免疫小鼠14天后，將致死

3、性劑量的弓形蟲（RH株）速殖子腹腔注射到小鼠體內(nèi)，通過觀察小鼠的存活時間進(jìn)而來驗(yàn)證DNA疫苗并且結(jié)合不同佐劑對小鼠的免疫保護(hù)性。
　　結(jié)果:所有實(shí)驗(yàn)組(Toxofilin，Toxofilin+alum，Toxofilin+MPLA，Toxofilin+alum+MPLA)免疫小鼠后，在其小鼠體內(nèi)，細(xì)胞免疫與體液免疫水平都明顯高于對照組(PBS，alum，MPLA)。此外，與單基因組(Toxofilin)疫苗相比，alum+Toxo

4、filin基因疫苗聯(lián)合使用增強(qiáng)了體液免疫應(yīng)答與Th2型細(xì)胞免疫應(yīng)答，相反地MPLA+Toxofilin一起使用增強(qiáng)了體液免疫應(yīng)答與Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)。更重要地是，與alum+Toxofilin相比，將MPLA與alum+Toxofilin基因疫苗聯(lián)合使用能夠轉(zhuǎn)變alum+Toxofilin基因疫苗中細(xì)胞免疫應(yīng)答的類型，將Th2型細(xì)胞免疫轉(zhuǎn)變?yōu)門h1型細(xì)胞免疫，同時，在alum+MPLA+Toxofilin基因疫苗免疫組中，體液免疫與T