熒光光譜法測(cè)定生物大分子的研究及應(yīng)用.pdf

1、蛋白質(zhì)和核酸是構(gòu)成機(jī)體的兩種重要的生物大分子。核酸是生物基本遺傳物質(zhì)，與生物生長、發(fā)育及癌變、突變等異?；顒?dòng)相關(guān)；蛋白質(zhì)則負(fù)責(zé)各種生理功能，維持生物體新陳代謝活動(dòng)，是生物性狀直接表達(dá)者。它們是生物化學(xué)與生命科學(xué)中重要的兩類生物大分子。因此研究機(jī)體分子結(jié)構(gòu)、功能以及定性和定量分析，已成為當(dāng)前生物分析化學(xué)研究的前沿?zé)狳c(diǎn)之一。
　　 本文以熒光、共振散射技術(shù)為主要研究手段，建立快速靈敏的檢測(cè)蛋白質(zhì)與核酸新方法，同時(shí)應(yīng)用TEM、吸收光譜

2、技術(shù)等手段進(jìn)行機(jī)理研究和探討。
　　 本文共分為五部分，第一部分綜述了生物大分子熒光探針以及納米粒子作為光譜探針在生物分析中的研究進(jìn)展及分析應(yīng)用。
　　 在論文的第二部分，研究了桑色素-Al(Ⅲ)-蛋白質(zhì)體系的熒光增強(qiáng)效應(yīng)，建立了蛋白質(zhì)測(cè)定的新方法。本研究發(fā)現(xiàn)，BSA的加入可以顯著增加桑色素-Al(Ⅲ)的熒光強(qiáng)度，據(jù)此建立了一種檢測(cè)蛋白質(zhì)的快速、靈敏、簡(jiǎn)便的熒光光譜法。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下體系的熒光強(qiáng)度與蛋白質(zhì)的濃度在一定范

3、圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，檢出限可達(dá)10-9gmL-1，并成功應(yīng)用于實(shí)際樣品的檢測(cè)中。機(jī)理研究表明桑色素的羥基與Al(Ⅲ)配位形成桑色素-Al(Ⅲ)配合物，由于Al(Ⅲ)的架橋作用，產(chǎn)生大的聚合體，導(dǎo)致體系熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)，求得能量轉(zhuǎn)移率E=0.75。
　　 在論文的第三部分，研究發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)可以顯著增強(qiáng)槲皮素-Al(Ⅲ）體系的熒光，從而建立了一個(gè)測(cè)定蛋白質(zhì)的新體系。在最佳條件下，BSA與EA分別在1.0×10-8～3.0×10-7g·

4、ml-1和5.0×10-8～4.5×10-7g·ml-1范圍內(nèi)與熒光強(qiáng)度呈良好的線性關(guān)系，檢出限分別為2.3×10-9和1.0×10-8g·mL-1，并且該體系穩(wěn)定性好選擇性高。研究了槲皮素、Al(Ⅲ)與BSA的作用機(jī)理，發(fā)現(xiàn)槲皮素、Al(Ⅲ)生成二元復(fù)合物，再與BSA結(jié)合，生成槲皮素-Al(Ⅲ)-BSA聚集體。
　　 在論文的第四部分，研究了桑色素、nanoTiO2和核酸的相互作用。研究發(fā)現(xiàn)核酸可以顯著增強(qiáng)nanoTiO2-桑

5、色素的熒光強(qiáng)度，且體系的熒光強(qiáng)度與核酸的濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。據(jù)此建立了測(cè)定核酸的新方法。ctDNA和yRNA的線性范圍分別為：2.0×10-8～2.2×10-7g·mL-1和1.0×10-8～2.5×10-7g·mL-1;檢出限分別為4.8×10-9g·mL-1和1.2×10-9g·mL-1，并成功應(yīng)用于實(shí)際樣品酵母RNA的測(cè)定。
　　 在論文的第五部分，研究了核酸對(duì)Al(Ⅲ)-nanoTiO2體系共振光散射強(qiáng)度的