一種異位心臟聯(lián)合異體復(fù)合組織同期移植動物模型的建立.pdf

1、實驗背景：近十幾年來，復(fù)合組織移植（CompositeTissue Allotransplantation， CTA），包括顏面移植，腹壁移植，手移植等，在世界范圍內(nèi)得到迅速發(fā)展，在越來越多的臨床應(yīng)用中取得了良好的修復(fù)效果。但是，由于復(fù)合組織移植大多是為了提升患者生存質(zhì)量，而非拯救生命所必須，長期服用免疫抑制劑帶來的毒副作用限制了它在臨床上的大范圍應(yīng)用。而內(nèi)臟器官移植（SolidOrgan Transplantation， SOT），如

2、心臟、肝臟、小腸等，作為器官衰竭終末期患者常規(guī)治療手段，具有龐大的患者群體，全球每年進(jìn)行各類內(nèi)臟器官移植10萬例以上，累積實施已經(jīng)達(dá)到數(shù)百萬例，等待實施的患者更是不計其數(shù)。在這個龐大群體中，有一部分患者可以同時實施復(fù)合組織移植進(jìn)一步提升生存質(zhì)量。例如，部分內(nèi)臟器官移植的患者存在創(chuàng)面閉合的難題，同時進(jìn)行復(fù)合組織移植修復(fù)成為一種新的有效方法，小腸、肝臟等內(nèi)臟器官聯(lián)合復(fù)合組織移植的臨床應(yīng)用顯示出令人鼓舞的效果。
　　然而內(nèi)臟器官與復(fù)合組

3、織聯(lián)合移植后在免疫排斥反應(yīng)中相互影響以及機(jī)制仍不清楚，必須構(gòu)建復(fù)合組織與內(nèi)臟器官聯(lián)合移植的動物模型。小鼠模型具有很多優(yōu)點：H-2抗原系統(tǒng)與人類白細(xì)胞抗原（(Human Leukocyte Antigen，HLA）相近，基因背景清楚，轉(zhuǎn)基因、敲除品系廣泛，各類抗體制劑、分子探針種類繁多，成本低廉，容易飼養(yǎng)。但是小鼠血管口徑很細(xì)，管壁很薄，常規(guī)的血管縫合技術(shù)并不能很好地解決血管吻合的問題。我們采用了Cuff套管技術(shù)，降低了血管吻合難度，縮短

4、了手術(shù)時間。
　　多種器官移植動物模型，如心臟、腎、肝臟、胰腺、小腸等早已產(chǎn)生，極大地提高了我們對器官移植免疫及生理的認(rèn)識水平。心臟移植是研究內(nèi)臟器官移植免疫學(xué)問題最常用的模型，其血管蒂粗大，含有多個血管分支可作為血管橋，且術(shù)后監(jiān)測簡單。而血管化的皮瓣相對于無血管蒂的皮片移植，更貼近臨床移植的復(fù)合組織。因此我們經(jīng)過實驗研究構(gòu)建了小鼠心臟聯(lián)合皮瓣同期移植模型。
　　實驗?zāi)康模?.通過解剖學(xué)觀察研究相關(guān)血管走行，構(gòu)建小鼠心臟移植

5、模型以及小鼠皮瓣移植模型，并初步研究兩種器官移植后排斥規(guī)律。2.在前期實驗基礎(chǔ)上進(jìn)一步構(gòu)建小鼠頸部心臟聯(lián)合皮瓣同期移植模型，并與小鼠頸部心臟聯(lián)合腹股溝部皮瓣同期移植模型比較手術(shù)時間差異。
　　實驗方法：1.心臟移植模型：將供體心臟移植至受體頸部，為頸部受區(qū)血管進(jìn)行Cuff套管，供體心臟主動脈與受體右側(cè)頸總動脈相吻合，肺動脈與受體右側(cè)頸外靜脈相吻合；皮瓣移植模型：將供體腹股溝皮瓣移植至受體頸部，為皮瓣股動脈股靜脈套管后分別與受體右側(cè)

6、頸總動脈和頸外靜脈吻合。同系移植組在C57BL/6小鼠間進(jìn)行，異系移植將Balb/c作為供體，C57BL/6作為受體。異系移植分為三組：A組移植后不用免疫抑制劑；B組移植后使用1mg/kg雷帕霉素；C組移植后先使用一周3mg/kg雷帕霉素，然后藥物濃度降為0.3mg/kg。術(shù)后觀察受體小鼠以及移植物情況，定期取材行組織病理學(xué)檢查以及流式細(xì)胞學(xué)檢測。2.小鼠心臟聯(lián)合皮瓣同期移植模型構(gòu)建方法為：取下供體腹股溝皮瓣并為血管蒂套管，然后取下供體

7、心臟，保留供體主動脈上右側(cè)頸總動脈分支；分離出受體右側(cè)頸總動脈以及雙側(cè)頸外靜脈，將心臟主動脈肺動脈分別與受體右側(cè)頸總動脈和頸外靜脈吻合，利用供心保留的右側(cè)頸總動脈作為血管橋與供體皮瓣股動脈連接，皮瓣靜脈與受體左側(cè)頸外靜脈連接。小鼠心臟聯(lián)合腹股溝部皮瓣同期移植模型則分別將供體心臟和皮瓣移植至受體頸部以及腹股溝部。實驗分為4組：A組解剖觀察組；B組假手術(shù)組，將C57BL/6小鼠頸部右側(cè)頸總動脈及雙側(cè)頸外靜脈結(jié)扎，驗證是否耐受手術(shù)創(chuàng)傷；C組構(gòu)

8、建小鼠心臟聯(lián)合皮瓣同期移植模型；D組構(gòu)建小鼠心臟聯(lián)合腹股溝部皮瓣同期移植模型進(jìn)行手術(shù)時間的比較。移植組在C57BL/6同系小鼠間進(jìn)行，每日觀察記錄受體狀態(tài)，皮瓣生長狀況，觸診心臟跳動情況，定期取材行組織病理學(xué)檢查。
　　實驗結(jié)果：1.單純心臟移植及單純皮瓣移植同系移植物可長期存活，異系心臟移植和皮瓣具有不同的排斥規(guī)律；2. C57BL/6小鼠一側(cè)頸總動脈、頸外靜脈及對側(cè)頸外靜脈剝離并結(jié)扎對其無明顯影響；3.小鼠頸部心臟聯(lián)合腹股溝部