人類胎兒睪丸組織異種移植模型的建立.pdf

1、目的：性別發(fā)育異常(DisordersofSexDevelopment，DSD)是指染色體性別與性腺性別或包括內外生殖器在內的表型性別的不一致，其中，男性性別分化發(fā)育幾乎完全依賴胚胎睪丸的激素分泌。睪丸源性生殖障礙綜合征(TesticularDysgenesisSyndrome，TDS)是包含兒童期隱睪、尿道下裂和成年期睪丸腫瘤。精子數量不足等四種臨床極為常見疾病在內的一種綜合癥。近幾十年來DSD和TDS發(fā)病率在不斷上升。目前觀點認為這

2、些異常源于胎兒時期睪丸受到環(huán)境內分泌干擾因子干擾致未正常分化發(fā)育，但絕大多數研究證據來源于動物實驗。建立去勢裸鼠為受體的異種人類睪丸組織移植模型，將為探索人類DSD和TDS的發(fā)病機制提供證據等級更高的研究載體。
　　 方法：切取10-13孕周非因疾病因素人工引產胎兒的性腺組織(n=12個)，剪成約1mm3組織塊，移植入雄性去勢裸鼠背部皮下，移植9周左右移植物回收，測量移植物大小重量。收集21孕周的人工引產胎兒睪丸組織作為同齡對照

3、標本(n=1)。通過對照睪丸組織移植前后標本，及同齡對照標本的組織細胞形態(tài)學改變和免疫組織化學表現，來觀察人類早期胎兒睪丸組織在異種異位的生長發(fā)育情況。
　　 結果：移植時胎兒性腺組織標本大小約1mm3、重約5mg，移植后取出的移植物最大重量為84.1mg。12例未成熟性腺組織移植后觀察到有11例在受體中繼續(xù)生長發(fā)育。其中7例為卵巢組織，4例為睪丸組織。共移植12個睪丸組織塊，回收9個組織塊，胚胎睪丸移植物的回收率為9/12(7

4、5％)。光鏡下移植物標本顯示出正常的大體形態(tài)，可辨認出含有Sertoli細胞和生殖細胞的生精小管，由含有Leydig細胞的間質細胞包繞。小管中無規(guī)則分布的原始生殖細胞和原始Sertoli細胞開始向基底膜部位遷移，其中部分原始生殖細胞已定位于基底膜處，并具有精原細胞的特征；Sertoli細胞也由幼稚狀態(tài)發(fā)育為具有豐富胞質的成熟型細胞，有序排列在精原細胞周圍，橢圓形的細胞核較整齊地排列于近基底膜部位，核的長軸垂直于基底膜，其幕布樣胞質將精原

5、細胞包圍，形成壁龕樣結構。
　　 免疫組化顯示，移植時標本中生精小管未完全形成，移植后生精小管形成并顯示出正常的形態(tài)。移植時Sertoli細胞(Vim染色顯示)已經聚集，但未形成明顯的生殖細胞索；許多生殖細胞(OCT4染色顯示)開始聚集，多表達細胞全能性標志物OCT4；未檢測到雄激素受體(AR)、抗苗勒管激素(AMH)，SMA表達。移植后，生殖細胞位于生精小管內，一些生殖細胞停止表達OCT4，被Sertoli細胞包繞，此時，生精