人類胎兒睪丸組織異種移植模型的建立.pdf

1、目的：性別發(fā)育異常(DisordersofSexDevelopment，DSD)是指染色體性別與性腺性別或包括內(nèi)外生殖器在內(nèi)的表型性別的不一致，其中，男性性別分化發(fā)育幾乎完全依賴胚胎睪丸的激素分泌。睪丸源性生殖障礙綜合征(TesticularDysgenesisSyndrome，TDS)是包含兒童期隱睪、尿道下裂和成年期睪丸腫瘤。精子數(shù)量不足等四種臨床極為常見(jiàn)疾病在內(nèi)的一種綜合癥。近幾十年來(lái)DSD和TDS發(fā)病率在不斷上升。目前觀點(diǎn)認(rèn)為這

2、些異常源于胎兒時(shí)期睪丸受到環(huán)境內(nèi)分泌干擾因子干擾致未正常分化發(fā)育，但絕大多數(shù)研究證據(jù)來(lái)源于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。建立去勢(shì)裸鼠為受體的異種人類睪丸組織移植模型，將為探索人類DSD和TDS的發(fā)病機(jī)制提供證據(jù)等級(jí)更高的研究載體。
　　 方法：切取10-13孕周非因疾病因素人工引產(chǎn)胎兒的性腺組織(n=12個(gè))，剪成約1mm3組織塊，移植入雄性去勢(shì)裸鼠背部皮下，移植9周左右移植物回收，測(cè)量移植物大小重量。收集21孕周的人工引產(chǎn)胎兒睪丸組織作為同齡對(duì)照

3、標(biāo)本(n=1)。通過(guò)對(duì)照睪丸組織移植前后標(biāo)本，及同齡對(duì)照標(biāo)本的組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變和免疫組織化學(xué)表現(xiàn)，來(lái)觀察人類早期胎兒睪丸組織在異種異位的生長(zhǎng)發(fā)育情況。
　　 結(jié)果：移植時(shí)胎兒性腺組織標(biāo)本大小約1mm3、重約5mg，移植后取出的移植物最大重量為84.1mg。12例未成熟性腺組織移植后觀察到有11例在受體中繼續(xù)生長(zhǎng)發(fā)育。其中7例為卵巢組織，4例為睪丸組織。共移植12個(gè)睪丸組織塊，回收9個(gè)組織塊，胚胎睪丸移植物的回收率為9/12(7

4、5％)。光鏡下移植物標(biāo)本顯示出正常的大體形態(tài)，可辨認(rèn)出含有Sertoli細(xì)胞和生殖細(xì)胞的生精小管，由含有Leydig細(xì)胞的間質(zhì)細(xì)胞包繞。小管中無(wú)規(guī)則分布的原始生殖細(xì)胞和原始Sertoli細(xì)胞開(kāi)始向基底膜部位遷移，其中部分原始生殖細(xì)胞已定位于基底膜處，并具有精原細(xì)胞的特征；Sertoli細(xì)胞也由幼稚狀態(tài)發(fā)育為具有豐富胞質(zhì)的成熟型細(xì)胞，有序排列在精原細(xì)胞周圍，橢圓形的細(xì)胞核較整齊地排列于近基底膜部位，核的長(zhǎng)軸垂直于基底膜，其幕布樣胞質(zhì)將精原

5、細(xì)胞包圍，形成壁龕樣結(jié)構(gòu)。
　　 免疫組化顯示，移植時(shí)標(biāo)本中生精小管未完全形成，移植后生精小管形成并顯示出正常的形態(tài)。移植時(shí)Sertoli細(xì)胞(Vim染色顯示)已經(jīng)聚集，但未形成明顯的生殖細(xì)胞索；許多生殖細(xì)胞(OCT4染色顯示)開(kāi)始聚集，多表達(dá)細(xì)胞全能性標(biāo)志物OCT4；未檢測(cè)到雄激素受體(AR)、抗苗勒管激素(AMH)，SMA表達(dá)。移植后，生殖細(xì)胞位于生精小管內(nèi)，一些生殖細(xì)胞停止表達(dá)OCT4，被Sertoli細(xì)胞包繞，此時(shí)，生精