青娥方及復(fù)方黨參方的藥學(xué)研究.pdf

1、本論文的研究聚焦于經(jīng)典復(fù)方青娥方和經(jīng)方復(fù)方黨參方。青娥方是出自《太平惠民和劑局方》的經(jīng)典名方，由杜仲（鹽制）、補(bǔ)骨脂（鹽制）、核桃仁（炒制）和大蒜四味中藥組成。方中各單味藥對(duì)學(xué)習(xí)記憶的保護(hù)作用的研究已有報(bào)道，但是關(guān)于青娥全方及其不同配伍對(duì)學(xué)習(xí)記憶方面的影響卻鮮有報(bào)道。復(fù)方黨參方是一個(gè)經(jīng)方，由黨參、當(dāng)歸、枸杞、天門冬、酒大黃組成，經(jīng)長(zhǎng)期臨床證實(shí)具有抗氧化、抗衰老等功能。本論文的目的之一是研究經(jīng)典復(fù)方青娥方不同配伍對(duì)東莨菪堿模型小鼠學(xué)習(xí)記憶

2、的改善作用；另一目的是基于復(fù)方黨參方的抗氧化功能的保健食品的研究。因此，本論文主要開展了如下工作：
　?。ㄒ唬┣喽鸱讲煌湮閷?duì)東莨菪堿模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的改善作用
　　青娥方及其不同拆方（杜仲、杜仲＋補(bǔ)骨脂、杜仲＋核桃仁、杜仲＋大蒜，杜仲＋補(bǔ)骨脂＋核桃仁＋大蒜、補(bǔ)骨脂）各按經(jīng)典復(fù)方配比，采用75％乙醇加熱回流提取，制得提取物。6個(gè)藥物配伍組，陽性組及模型組和空白對(duì)照組小鼠分別灌胃相應(yīng)的藥物2周后，東莨菪堿造模，研究各配伍藥物對(duì)

3、模型動(dòng)物學(xué)習(xí)和記憶的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除杜仲＋核桃仁外，其余配伍組均能不同程度延長(zhǎng)模型小鼠在跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)中的學(xué)習(xí)記憶潛伏期（P<0.05或P<0.01）；同時(shí)六種配伍提取物均能明顯降低模型小鼠在Morris水迷宮中的逃逸潛伏期（P<0.05或P<0.01），顯著增加模型小鼠在目的象限滯留時(shí)間百分比（P<0.05或P<0.01），升高目的象限運(yùn)動(dòng)距離百分比（P<0.05或P<0.01）。進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，青娥方不同配伍組可顯著降低小鼠海馬區(qū)域

4、AChE活性（P<0.01），增加BDNF的含量。其中以青娥全方的改善效果最為顯著。青娥方及其配伍組均具有改善東莨菪堿致小鼠短暫記憶障礙的效果，且全方效果優(yōu)于兩兩配伍組和君藥杜仲組及臣藥補(bǔ)骨脂組。該研究從青娥方對(duì)學(xué)習(xí)記憶的改善效果及其機(jī)制方面證實(shí)了其配伍的的合理性。
　?。ǘ?fù)方黨參膠囊的藥學(xué)研究
　　（1）提取工藝研究：采用L9(34)正交設(shè)計(jì)，以總多糖、總黃酮、總皂苷含量為指標(biāo)，優(yōu)選最佳的復(fù)方黨參方提取工藝。優(yōu)選的提取

5、工藝為：藥材按處方配比混合后，以8倍量水浸泡4h，提取3次，三次加水量分別為8,6,6，1h/次。該工藝條件下，提取率可達(dá)到47.16%，提取物中總多糖含量為700.05mg/g，總黃酮含量為12.27mg/g，總皂苷含量為111.88mg/g。
　?。?）提取物體外抗氧化研究：研究復(fù)方黨參方提取物對(duì)1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、羥自由基（·OH）、超氧陰離子自由基（O2-·）的清除能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)復(fù)方黨參方提取物在0

6、.04~1.23mg/ml濃度范圍內(nèi)，對(duì)三種自由基均有清除能力，且隨著濃度的增大，清除能力增強(qiáng)。
　　（3）劑型的選擇及制劑工藝研究：按擬定的膠囊劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。以提取物和不同輔料組成的混合物的吸濕百分率為指標(biāo)確定輔料的類型和比例；以成型率及制粒難易度為指標(biāo)，篩選制劑最佳的成型工藝。最終確定的輔料為微晶纖維素:糊精為1:3，且藥:輔比為1.5:1時(shí)，以60%乙醇為潤(rùn)濕劑，制得的囊心物流動(dòng)性較小，滿足生產(chǎn)需求。因此優(yōu)選的制劑工藝為：

7、以1.5:1的比例加入輔料（微晶纖維素:糊精=1:3），加60%乙醇作為潤(rùn)濕劑，20目篩制粒，80℃干燥，整粒，裝囊。
　　（4）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究：從定性鑒別、含量測(cè)定及檢查三方面對(duì)復(fù)方黨參膠囊進(jìn)行質(zhì)量控制研究。結(jié)果在薄層色譜鑒別中制劑中的當(dāng)歸、枸杞子、大黃斑點(diǎn)清晰，準(zhǔn)確，且陰性無影響；在檢查中，水分，裝量差異及崩解時(shí)限均符合《中國(guó)藥典》2015年版的相關(guān)要求；在含量測(cè)定中，作為制劑中定量指標(biāo)的有效成分還原糖、總黃酮及總皂苷的平均含量

8、分別為：23.20g/100g，8.71mg/100g，1.20g/100g。
　?。?）抗氧化功能評(píng)價(jià)：按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003版）》中抗氧化功能檢驗(yàn)的方法，分別研究了復(fù)方黨參膠囊對(duì)D-半乳糖致衰老模型小鼠和60Coγ射線輻照模型小鼠血清及肝臟中丙二醛（MDA）水平、總超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在D-半乳糖衰老模型中，復(fù)方黨參膠囊的中（1.2g/kg）、

9、低劑量（0.6g/kg）均能明顯提高小鼠血清和肝臟中T-SOD活性（P<0.05或P<0.01），顯著提高血清中GSH-Px活性（P<0.05或P<0.01），顯著降低肝組織中MDA含量（P<0.01）；高劑量（2.4g/kg）能顯著降低血清和肝臟中MDA含量（P<0.05或P<0.01），同時(shí)顯著提高血清中T-SOD活性（P<0.01）。在60Coγ輻照模型中，復(fù)方黨參膠囊的高劑量能夠顯著升高模型小鼠血清和肝臟中的GSH-Px活性（P