補腎調經湯對PCOS大鼠卵巢顆粒細胞CYP450表達及雄激素影響的實驗研究.pdf

1、　　目的：本課題以中醫(yī)基礎理論為依據(jù),結合現(xiàn)代醫(yī)學技術,通過實驗研究,觀察補腎調經湯對 Poretsky 法所致多囊卵巢綜合征模型大鼠卵巢顆粒細胞CYP450蛋白表達、血清雄激素(T)、卵巢組織形態(tài)學變化的影響,探討補腎調經湯治療多囊卵巢綜合征的作用機理,為中醫(yī)藥治療多囊卵巢綜合征的有效性提供科學的理論依據(jù)。
　　方法：本課題選用 70 日齡左右的 SPF 級雌性大鼠 70 只為研究對象,適應性喂養(yǎng) 3 天,觀察大鼠陰道脫落細

2、胞學變化 10 天,未建立完整動情周期的 10 只大鼠剔除。參與實驗的 60 只大鼠,除空白組 12 只每日注射等容積注射用水外,其余動物采用 Poretsky 法(皮下注射胰島素+HCG)制成多囊卵巢綜合征大鼠模型。第23天隨機取 8 只,檢測陰道脫落細胞涂片、雄激素水平、鏡下觀察卵巢組織變化,與空白組隨機取 2 只對照,以驗證模型制作成功與否。模型制作成功后,實驗動物被隨機分為：模型對照組(模型組)、補腎調經湯高劑量組(簡稱高劑量組

3、)、補腎調經湯低劑量組(簡稱低劑量組)、陽性對照組,每組10只。在同種飼養(yǎng)條件下,治療的同時,正常組、模型組每鼠每日按20ml/kg灌服蒸餾水,高劑量組按每日 38.0g生藥/kg灌服；低劑量組按每日 19.0g生藥/kg灌服,陽性對照組按每日 0.42g/kg 灌服達英-35,均連續(xù)給藥 21 天。給藥 21 天后,處死大鼠,免疫組化法觀察大鼠卵巢顆粒細胞CYP450蛋白的表達情況；放免法檢測血清 T 水平；光鏡觀察卵巢組織形態(tài)學的變

4、化。
　　結果：(1)對大鼠卵巢顆粒細胞CYP450蛋白表達的影響：從陽性區(qū)平均積分光密度可知模型對照組均低于其余各組,且有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)；模型對照組與高劑量組、低劑量組、陽性對照組均有差異(P<0.05或P<0.01)；高劑量組與陽性對照組有顯著性差異(P<0.01)；高、低劑量組間比較無差異(P>0.05)。
　　( 2)對大鼠血清T的影響：統(tǒng)計學處理大鼠血清T水平數(shù)據(jù)顯示,模型對照組睪

5、酮(T)水平顯著升高,各治療組的血清睪酮(T)水平降低,其中尤以高劑量治療組的血清睪酮(T)水平降低最明顯(P<0.01)。
　　(3)對實驗大鼠卵巢組織形態(tài)學的影響：正常組卵巢色澤鮮紅,組織結構完整,可見多個不同發(fā)育階段的卵泡,成熟的卵泡內可見卵母細胞及放射冠。顆粒細胞呈多層,形態(tài)相當完整且排列整齊,卵泡膜細胞呈梭形排列。
　　模型對照組大鼠卵巢表面蒼白,單側或雙側卵巢體積增大,組織結構相當紊亂,大多數(shù)卵泡呈囊狀擴

6、張或閉鎖狀,其中夾雜少許發(fā)育正常的卵泡,顆粒細胞層數(shù)減少,排列疏松,卵泡膜細胞層及膜間質細胞明顯增厚。卵冠丘復合體消失,黃體數(shù)量明顯下降并伴有不完全的黃素化；給予補腎調經湯高、低劑量及達英-35干預后的三組大鼠卵巢色澤紅,體積減小,光鏡下卵巢結構較完整,可見不同發(fā)育階段的卵泡及較多黃體,卵泡囊性擴張減少或消失,卵泡內顆粒細胞層數(shù)增多,卵泡內可見到卵丘。卵泡膜細胞層較模型組變薄。
　　結論：補腎調經湯能增強大鼠卵巢顆粒細胞CYP