亞低溫對顱腦創(chuàng)傷后 necroptosis的影響及機制研究.pdf

1、目的：研究necroptosis新的細胞死亡方式在顱腦創(chuàng)傷（TBI）后的發(fā)生發(fā)展情況，以及探索亞低溫干預對其表達變化的影響。初步探討necroptosis在TBI組織病理發(fā)生發(fā)展中的潛在意義，為揭示亞低溫治療在TBI后發(fā)揮腦保護作用的潛在機制提供新層次的分子學基礎。
　　方法：構建成年雄性SD大鼠（210-260 g）液壓顱腦創(chuàng)傷模型，按傷后6h、24h和72h不同時段取損傷側大腦皮層和海馬組織，通過熒光定量 PCR和Wester

2、n-blot檢測necroptosis的關鍵調控分子RIP3和MLKL在不同時間段mRNA和蛋白的表達變化；在完成打擊操作后30分鐘進行亞低溫(33-35)或側腦室藥物注射處理。通過Western-blot和免疫組化染色等觀察亞低溫對TBI后6h傷側皮層和海馬腦組織RIP1、RIP3和MLKL蛋白表達變化，活體碘化丙啶染色檢測細胞壞死情況，HE染色檢測腦組織挫傷量等；通過Western-blot檢測注射對照試劑DMSO，以及nec-1、

3、GSK’872和NSA等壞死性凋亡靶向抑制劑對TBI后6h傷側皮層炎癥因子HMGB1、TNF-α、IL-6和IL-18表達情況。
　　結果：與SHAM組相比較，傷側皮層RIP1、RIP3和MLKL在TBI后6h明顯升高（p<0.05），而在24h和72h時間段則無明顯差異；海馬組織僅在TBI后6h的RIP1和 RIP3的免疫組織化學染色中出現(xiàn)明顯升高（p<0.05），在Western-blot檢測中壞死性凋亡的關鍵蛋白表達均未見明

4、顯差異；在使用亞低溫處理后，傷側皮層RIP1、RIP3和MLKL以及傷側海馬RIP1、RIP3表達均明顯降低；TBI組PI陽性染色細胞數(shù)較SHAM組明顯增多（p<0.01），在HT處理后顯著下降（p<0.01）；TBI后亞低溫組較常溫組腦組織挫傷量顯著減少（p<0.01）；挫傷側皮層組織HMGB1、TNF-α、IL-6和IL-18等炎癥因子表達在TBI后6小時均較SHAM組出現(xiàn)不同程度升高,并均可被亞低溫及GSK’872顯著抑制；此外，