Corin在糖尿病心肌病發(fā)病機制中的作用.pdf

1、目的：
　　隨著糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）發(fā)病率的逐年上升，糖尿病并發(fā)癥日益受到人們的重視。糖尿病心肌病（diabetic cardiomyopathy，DCM）是糖尿病患者主要心臟并發(fā)癥之一，也是糖尿病患者的首要死因。目前糖尿病心肌病發(fā)病機制尚未完全清楚。有研究表明血管重構是糖尿病心肌病的病理生理學基礎,心臟酶Corin可以高度特異性的將心房利鈉肽前體（pro-atrial natriuretic pep

2、tide， pro-ANP）轉換為具有生物學活性的心房利鈉肽（atrial natriuretic peptide，ANP），而且我們前期研究發(fā)現(xiàn)Corin缺失與血管重構密切相關。因此本文旨在通過體外高糖誘導H9c2心肌細胞株及糖尿病心肌病大鼠動物模型，采用相關分子生物學及細胞生物學技術，探討 Corin在糖尿病心肌病發(fā)病機制中的作用,期待為糖尿病心肌病的防治提供新的視角和治療靶點。
　　方法：
　　1.Real-time

3、PCR檢測高糖誘導的H9c2心肌細胞株Corin mRNA水平的表達。
　　2.免疫熒光染色方法檢測高糖誘導的H9c2心肌細胞株Corin表達水平。
　　3.構建Corin-siRNA H9c2心肌細胞，real-time PCR檢測Corin-siRNA的H9c2心肌細胞CORIN基因干擾效率。
　　4.Western blot進一步驗證Corin-siRNA的H9c2心肌細胞CORIN基因干擾效率。
　　5.

4、普通光學顯微鏡下觀察Corin-siRNA H9c2心肌細胞的增殖情況。
　　6.MTT比色法及臺盼藍染色方法檢測Corin-siRNA H9c2心肌細胞的活力。
　　7.內皮細胞劃痕實驗檢測Corin-siRNA H9c2心肌細胞上清液對于EA. hy926內皮細胞的影響。
　　8.檢測1型糖尿病心肌病SD大鼠動物模型隨機血糖、體重的改變；超聲心動圖檢測1型糖尿病心肌病SD大鼠動物模型心臟的構型及功能變化，包括舒張末

5、期左室內徑（LVIDd）、舒張末期室間隔厚度（IVSd）、舒張末期左室后壁厚度（LVPWd）、收縮末期左室內徑（LVIDs）、收縮末期室間隔厚度（IVSs）、收縮末期左室后壁厚度（LVPWs）、左室縮短分數（left ventricular fractional shortening，％FS）、射血分數（ejection fraction，EF）以及二尖瓣口舒張期流速E/A比值。
　　9.免疫熒光染色檢測糖尿病心肌病大鼠心肌組織i

6、so-lectin B4的表達情況。
　　結果：
　　1.Real-time PCR結果表明，在高糖誘導的H9c2心肌細胞株中，與NG組相比， Corin mRNA表達水平明顯下降（P<0.01）。
　　2.免疫熒光染色結果觀察到，在高糖環(huán)境下的 H9c2心肌細胞株中，與 NG、OC組相比，Corin表達水平顯著下降。
　　3.Real-time PCR結果表明，導入H9c2心肌細胞中的Corin-siRNA序列

7、1和序列2的CORIN基因干擾效率分別為55.86%、54.71%（P<0.01）。
　　4.Western blot結果表明，與NC-siRNA組相比，導入Corin-siRNA序列1和序列2的H9c2心肌細胞中，Corin在蛋白水平的表達明顯下降。
　　5.普通光學顯微鏡下觀察，與NC-siRNA組相比，在Corin-siRNA H9c2心肌細胞的增殖明顯受到抑制。
　　6. MTT比色法及臺盼藍染色法結果顯示，與

8、NC-siRNA組相比， Corin-siRNA H9c2心肌細胞數和活力明顯下降（P<0.01）。
　　7.內皮細胞劃痕實驗表明，與NC-siRNA組相比，Corin-siRNA H9c2細胞抑制了EA. hy926內皮細胞的損傷后修復。
　　8.與對照組相比，糖尿病心肌病大鼠隨機血糖明顯升高（P<0.01），體重明顯降低（P<0.01）。超聲心動圖監(jiān)測顯示與對照組相比，糖尿病心肌病大鼠LVIDs明顯升高（P<0.01），

9、IVSs、LVPWs均明顯降低（P<0.01），%FS、EF明顯下降（P<0.01），而IVSd減?。≒<0.05），LVIDd、LVPWd均明顯下降（P<0.01），E/A值沒有統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　9.免疫熒光染色結果顯示，與對照組相比，DCM組心肌組織iso-lectin B4的表達明顯下降（P<0.01）。
　　結論：
　　1.成功構建Corin缺失的H9c2細胞模型；
　　2. Corin具