2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、帕金森病(Parkinson's disease,PD)是全球第二大神經(jīng)退行性疾病,嚴(yán)重影響著中老年患者的身心健康。病理特征為中腦黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元變性壞死,發(fā)病機(jī)制尚不明確。目前尚無(wú)確切可靠藥物延遲或阻斷PD發(fā)病進(jìn)程。研究表明原花青素在腦中具有良好的神經(jīng)保護(hù)作用,在PD防治中顯示了良好的前景。本研究從細(xì)胞模型著手,以LPS激活小膠質(zhì)細(xì)胞BV2細(xì)胞誘發(fā)炎癥損傷和魚(yú)藤酮誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷建立體外帕金森病模型

2、,觀察原花青素對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞激活引起的炎癥損傷及魚(yú)藤酮誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元氧化損傷的影響,從炎癥、線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激、凋亡各角度探討原花青素對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥損傷及多巴胺能神經(jīng)元氧化損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制,以期為帕金森病的臨床防治提供可靠依據(jù)。
  實(shí)驗(yàn)研究分為兩部分:
  第一部分 原花青素對(duì)LPS誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥損傷的保護(hù)作用
  目的:
  采用LPS激活BV2細(xì)胞建立帕金森病炎癥模型,研究原花青素對(duì)B

3、V2細(xì)胞激活介導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞炎癥損傷中的保護(hù)作用,從轉(zhuǎn)錄因子NF-κB通路探討原花青素抑制BV2細(xì)胞活化的機(jī)制。
  方法:
  1.以不同濃度LPS(0.01、0.1、1.0、10.0μg/mL)作用BV2細(xì)胞24h,Griess法檢測(cè)細(xì)胞上清中一氧化氮(NO)水平,選取合適濃度的LPS激活BV2細(xì)胞構(gòu)建炎癥損傷模型,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
  2.MTT法檢測(cè)LPS及原花青素對(duì)BV2細(xì)胞毒性的影響。設(shè)立調(diào)零組、正常對(duì)

4、照組、LPS(1.0μg/mL)處理組、原花青素(0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL)處理組、LPS(1.0μg/mL)+原花青素(0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL)處理組,分別作用24h檢測(cè)各組存活率。
  3.以LPS(1.0μg/mL)激活BV2細(xì)胞培養(yǎng)液作為炎癥條件培養(yǎng)液(conditioned medium,CM),培養(yǎng)多巴胺能神經(jīng)元SH-SY5Y細(xì)胞,設(shè)立對(duì)照組、LPS組、靜息BV2上清(C-CM)組、L

5、PS活化BV2細(xì)胞的條件培養(yǎng)液(LPS-CM)組及LPS-CM+原花青素(0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL)處理組,分別作用24h,以MTT法檢測(cè)上述各組細(xì)胞的活力。
  4.以LPS激活BV2細(xì)胞,設(shè)立對(duì)照組、LPS組及LPS+原花青素(0.1、0.5、1.0、5.0μ.g/mL)組。各組作用24h后采用Griess法檢測(cè)BV2細(xì)胞培養(yǎng)上清中一氧化氮(NO)水平;ELISA法檢測(cè)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素

6、-1β(IL-1β)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)的分泌水平,WST-1法檢測(cè)超氧化物(Superoxide)水平。
  5.在轉(zhuǎn)錄因子水平探討原花青素的抑制作用是否與NF-κB的活化有關(guān),設(shè)立對(duì)照組、原花青素(5.0μg/mL)、LPS(1.0μg/mL)組及LPS+原花青素(0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL)組,各組處理1h,Western blot法檢測(cè)NF-κB p65和磷酸化NF-κB p65的表達(dá)。
  結(jié)

7、果:
  1.與對(duì)照組比較,各濃度LPS顯著增加BV2細(xì)胞NO釋放水平,10.0μg/mL LPS較1.0μg/mL的濃度未顯著增加NO水平,故選取較低濃度1.0μg/mL LPS作為造模濃度。
  2.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL濃度的原花青素單獨(dú)或與1.0μg/mL LPS共同作用于BV2細(xì)胞24h,其細(xì)胞生存率與正常對(duì)照組相比,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明在實(shí)驗(yàn)所用的劑量范圍

8、內(nèi),原花青素對(duì)靜息狀態(tài)或LPS激活狀態(tài)的BV2細(xì)胞無(wú)毒性作用。
  3.與對(duì)照組比較,LPS(1.0μg/mL)、靜息BV2上清處理SH-SY5Y細(xì)胞存活率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,LPS活化BV2細(xì)胞的條件培養(yǎng)液使細(xì)胞活力下降55%,原花青素預(yù)處理能顯著提高SH-SY5Y細(xì)胞存活率。
  4.與對(duì)照組比較,LPS處理明顯增加了BV2細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)NO、TNF-α、IL-1β、IL-6和超氧化物的水平。不同濃度原花青素預(yù)處理抑制了活化

9、的BV2細(xì)胞炎癥介質(zhì)的釋放,且隨原花青素的濃度增大抑制作用增強(qiáng)。
  5.與對(duì)照組比較,LPS顯著升高了BV2細(xì)胞NF-κB p65磷酸化水平,各濃度原花青素下調(diào)LPS誘導(dǎo)磷酸化NF-κB p65的表達(dá),提示原花青素可抑制NF-κB通路的活化。
  結(jié)論:
  LPS激活BV2細(xì)胞后誘導(dǎo)大量炎癥介質(zhì)的釋放,從而損傷SH-SY5Y細(xì)胞;原花青素可通過(guò)下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化,抑制激活的BV2細(xì)胞炎癥介質(zhì)的釋放,對(duì)小膠

10、質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷發(fā)揮保護(hù)作用。
  第二部分 原花青素對(duì)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
  目的:
  以魚(yú)藤酮誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷建立體外帕金森病模型,從氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡探討原花青素對(duì)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。
  方法:
  1.以不同濃度魚(yú)藤酮(0.04、0.2、1.0、5.0μM)處理SH-SY5Y細(xì)胞24h,用MTT法檢測(cè)魚(yú)

11、藤酮對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞活性的影響,選取合適濃度的魚(yú)藤酮損傷SH-SY5Y細(xì)胞構(gòu)建帕金森病細(xì)胞模型,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
  2.為闡明魚(yú)藤酮損傷機(jī)制,以魚(yú)藤酮(1.0μM)損傷SH-SY5Y細(xì)胞24h,顯微鏡下觀察細(xì)胞受損形態(tài)。氧化應(yīng)激反應(yīng)方面采用生化法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)SOD、MDA水平,線粒體功能方面以JC-1熒光探針檢測(cè)線粒體膜電位,最后以AnnexinⅤ-FITC/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡率、比色法檢測(cè)caspase-3活化水平分析魚(yú)藤酮

12、是否引起SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡。
  3.以原花青素(0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL)+魚(yú)藤酮(1.0μM)處理SH-SY5Y細(xì)胞,同法檢測(cè)SH-SY5Y細(xì)胞存活率、SOD、MDA、線粒體膜電位以及凋亡率和caspaSe-3活化水平,分析原花青素能否通過(guò)改善細(xì)胞氧化應(yīng)激水平和線粒體功能而減弱SH-SY5Y細(xì)胞凋亡。
  結(jié)果:
  1.不同濃度魚(yú)藤酮處理SH-SY5Y細(xì)胞的活力隨魚(yú)藤酮濃度增大而降低,1.0

13、μM魚(yú)藤酮引起50%細(xì)胞活力下降,5.0μM魚(yú)藤酮未顯著增加細(xì)胞存活率的降低,故選取較低濃度1.0μM魚(yú)藤酮作為造模濃度。
  2.經(jīng)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞活性下降,細(xì)胞形態(tài)改變,構(gòu)建了帕金森病細(xì)胞模型。細(xì)胞內(nèi)SOD水平下降、MDA含量增多,線粒體膜電位下降,導(dǎo)致凋亡率上升,caspase-3活化水平升高,表明魚(yú)藤酮通過(guò)增加細(xì)胞氧化應(yīng)激水平和線粒體功能障礙引起SH-SY5Y細(xì)胞凋亡。
  3.預(yù)處理不同濃度原花青素較魚(yú)

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