弓形蟲感染誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化以及米諾環(huán)素的抑制作用.pdf

1、背景及目的：弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,能感染包括人在內(nèi)的幾乎所有的恒溫動(dòng)物。無(wú)論是先天性還是獲得性感染,都對(duì)人類的健康產(chǎn)生嚴(yán)重的威脅。先天性弓形蟲病主要表現(xiàn)為腦積水、腦鈣化、出生后智力發(fā)育遲緩、癲癇等;獲得性弓形蟲病可表現(xiàn)為頭痛、發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大,免疫力低下患者可并發(fā)全身嚴(yán)重弓形蟲病,例如弓形蟲腦炎等。在機(jī)體免疫缺陷或功能低下時(shí),腦部的包囊破裂,緩殖子向速殖子轉(zhuǎn)化,弓形蟲隱性感染狀態(tài)被活化,導(dǎo)致致命性弓形蟲腦炎的發(fā)生。弓形蟲不同的

2、基因型與疾病的發(fā)生、發(fā)展以及結(jié)局有關(guān)。在北美和歐洲,主要的弓形蟲基因型為TypeI、TypeII和TypeIII,而我國(guó)的優(yōu)勢(shì)基因型為Chinese1型。小膠質(zhì)細(xì)胞,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的固有免疫成分,包括靜息和活化兩種狀態(tài),在腦部病理?yè)p傷時(shí)發(fā)揮著重要的作用。在感染、損傷等刺激時(shí),小膠質(zhì)細(xì)胞能活化,分化、增殖并分泌大量的神經(jīng)毒性因子,發(fā)揮免疫保護(hù)功能,但是小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度的活化也會(huì)對(duì)神經(jīng)元等周圍組織產(chǎn)生損傷。在弓形蟲感染中,對(duì)于小膠質(zhì)細(xì)胞

3、的影響尚不十分清楚。本文主要研究小膠質(zhì)細(xì)胞(BV-2)細(xì)胞系在弓形蟲TgCtwh6蟲株(Chinese1基因型,成囊株)感染中的變化,并加入了小膠質(zhì)細(xì)胞的抑制劑米諾環(huán)素(minocycline),以了解其對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的抑制作用,進(jìn)而為弓形蟲腦病的防治提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：在transwell共培養(yǎng)體系中用弓形蟲TgCtwh6蟲株感染BV-2細(xì)胞,同時(shí)用米諾環(huán)素進(jìn)行干預(yù),分為普通培養(yǎng)基對(duì)照組、弓形蟲TgCtwh6蟲株感染的代謝物

4、作用組和米諾環(huán)素抑制劑組。在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài);用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量;用Griess法檢測(cè)細(xì)胞上清中NO的含量;RT-PCR法檢測(cè)BV-2細(xì)胞IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOSmRNA的表達(dá);Westernblotting檢測(cè)BV-2細(xì)胞iNOS蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比,弓形蟲代謝物作用組的小膠質(zhì)細(xì)胞胞體變圓,突起減少;流式結(jié)果顯

5、示BV-2細(xì)胞感染弓形蟲24h且BV-2細(xì)胞與弓形蟲速殖子比例為1:1時(shí)出現(xiàn)凋亡,培養(yǎng)48h,BV-2細(xì)胞與弓形蟲速殖子比例為1:5時(shí)BV-2細(xì)胞的凋亡率達(dá)35.72％;弓形蟲代謝物作用組的BV-2細(xì)胞分泌炎癥因子,其中培養(yǎng)上清中IL-1β、IL-6、TNF-α、NO的含量、BV-2細(xì)胞IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOSmRNA的表達(dá)以及iNOS蛋白的表達(dá)均隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)和弓形蟲速殖子與BV-2細(xì)胞比例的提高逐漸增加,米諾環(huán)