肝移植患者外周血中藥物代謝酶基因表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　研究肝移植患者術(shù)后外周血中藥物代謝酶基因表達(dá)情況，探究在肝移植術(shù)后將檢測(cè)藥物代謝酶基因表達(dá)量應(yīng)用于預(yù)測(cè)肝損傷，從而進(jìn)一步指導(dǎo)臨床用藥。
　　方法：
　　選取2013年10月~2014年4月在天津市第一中心醫(yī)院進(jìn)行肝移植的患者64例，64例患者均采用三聯(lián)免疫抑制治療方案。采集患者術(shù)后三周的外周血，對(duì)收集到的臨床數(shù)據(jù)采用非線性混合效應(yīng)模型（Nonlinear Mixed Effect Model， NONMEM

2、）進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)他克莫司的清除率主要受總膽紅素、血紅蛋白、術(shù)后時(shí)間、血尿素氮的影響，除了上述指標(biāo)外還將白蛋白、總蛋白指標(biāo)納入研究。首先從術(shù)后三周的樣本中篩選出8例，根據(jù)他克莫司不同的血藥濃度分為兩組：血藥濃度高組和血藥濃度低組；提取外周血中 RNA逆轉(zhuǎn)成 cDNA，采用 RT2 Profiler PCR Array篩查兩組差異表達(dá)的基因；采用64例樣本驗(yàn)證RT2Profiler PCR Array結(jié)果；采用重組人源CYP酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表達(dá)發(fā)

3、生變化的基因與免疫抑制劑的代謝關(guān)系；采用iMLDR技術(shù)對(duì)與抑制劑代謝有關(guān)的藥物代謝酶進(jìn)行基因分型。
　　結(jié)果：
　　(1)對(duì)研究人群術(shù)后三周的臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、總膽紅素的濃度異常，說明肝臟存在損傷。上述指標(biāo)與他克莫司進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)總膽紅素濃度與他克莫司血藥濃度成負(fù)相關(guān)（r=-0.300， P<0.05）。
　　(2)采用三種RT2Profiler PCR Array檢測(cè)他克莫司血

4、藥濃度高組與血藥濃度低組差異表達(dá)基因，通過分析共發(fā)現(xiàn)29個(gè)差異表達(dá)基因（差異倍數(shù)>1.5，P<0.05），相比于血藥濃度高組，29個(gè)差異表達(dá)基因在血藥濃度低組表達(dá)量均升高。
　　(3)本研究篩選出的29個(gè)基因來自細(xì)胞色素P450酶系、乙醛脫氫酶系、乙醇脫氫酶系、酯酶系、前列腺素-內(nèi)過氧化物合成酶系、黃嘌呤脫氫酶系、脫羧酶系、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶系、N-乙酰轉(zhuǎn)移酶系、磺基轉(zhuǎn)移酶系，29個(gè)基因中12個(gè)屬于P450酶系，說明P450酶系的酶變

5、化更明顯。
　　(4)采用64例樣本對(duì)RT2Profiler PCRArray結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，得出6個(gè)有意義的基因，分別為CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1、CYP19A1，6個(gè)基因都屬于P450酶系。相比于他克莫司血藥濃度高組，6個(gè)基因在血藥濃度低組表達(dá)量均升高，與RT2Profiler PCRArray結(jié)果一致。分別將各基因表達(dá)量與他克莫司血藥濃度進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)CYP3A5(r=-0.3

6、81，P<0.05)、CYP4A11（r=-0.331，P<0.05）、CYP2B6（r=-0.339，P<0.05）與他克莫司血藥濃度呈負(fù)相關(guān)。
　　(5)三種免疫抑制劑(他克莫司、嗎替麥考酚酯、甲基強(qiáng)的松龍)分別與5個(gè)重組人源P450酶（CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1）孵育，應(yīng)用HPLC-MS法測(cè)定孵育液中免疫抑制劑的剩余量。結(jié)果證明CYP3A5參與他克莫司的代謝轉(zhuǎn)化，CYP17A1參

7、與嗎替麥考酚酯的代謝轉(zhuǎn)化。
　　(6)采用iMLDR技術(shù)對(duì)CYP17A1基因的6個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，通過統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)CYP17A1的rs17115149位點(diǎn)的G/G基因型的表達(dá)量比G/T基因型的表達(dá)量低（P<0.05）。其他幾個(gè)SNP位點(diǎn)不同的基因型表達(dá)量沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　肝移植患者術(shù)后他克莫司血藥濃度與外周血中CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1、CYP19A