湖南地區(qū)兒童痙攣性咳嗽病原譜及臨床特征分析.pdf

1、目的：通過百日咳桿菌及其他多種病原檢測了解湖南地區(qū)痙攣性咳嗽兒童感染病原譜并總結(jié)其臨床特點，指導臨床治療,為本地區(qū)兒童呼吸道感染的防治及進一步的研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.建立檢測百日咳桿菌(Bordetella pertussis，BP)的實時熒光定量PCR方法，并對其敏感性、特異性及穩(wěn)定性等進行評估。
　　2.收集2015年1月-2015年12月湖南地區(qū)因痙攣性咳嗽就診兒童的鼻咽拭子及鼻咽抽吸物(Nasop

2、haryngeaaspirates samples，NPAs)標本。
　　3.采用實時熒光定量PCR法，對鼻咽拭子標本進行百日咳桿菌（BP）、肺炎支原體(MP)、肺炎衣原體(CP)、腺病毒（ADV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、冠狀病毒（HCOV-229E、HCOV-OC43）、博卡病毒（HBOV）、鼻病毒（HRV）、流感病毒（IFVA-B）、副流感病毒（PIV1-3）的檢測。采用細菌培養(yǎng)法對NPAs標本進行細菌檢測。
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3、.對湖南地區(qū)痙攣咳嗽兒童的感染病原譜及臨床特點進行分析。
　　結(jié)果：
　　1.已建立的實時熒光定量PCR法在BP檢測濃度為2×102-109copies/ml范圍內(nèi)有良好的線性，線性相關(guān)系數(shù)為0.9997。
　　2.實時熒光定量PCR法的最低檢測限為200copies/ml。
　　3.建立的實時熒光定量PCR法檢測其它常見病原體（包括肺炎支原體，肺炎衣原體，腺病毒，流感病毒，鼻病毒，呼吸道合胞病毒，人類冠狀病毒2

4、29E,人類冠狀病毒 OC43,人類冠狀病毒HKU1,人類冠狀病毒NL63，人類博卡病毒等）均無擴增曲線，特異性好。
　　4.采用建立的實時熒光定量PCR法分別對低濃度與高濃度兩個不同濃度的標準品各重復檢測8次，匯總獲得Ct值，分別計算其平均數(shù)、標準差和8次檢測結(jié)果的變異系數(shù)。所有樣本檢測均為陽性，并且變異系數(shù)均小于5％，表明該方法的穩(wěn)定性和重復性好。
　　5.實時熒光定量PCR法檢測濃度梯度為1×108CFU/ml、1×1

5、07copies/ml、1×106CFU/ml、1×105CFU/ml、1×104CFU/ml、1×103CFU/ml的6個百日咳標準株樣本，均能看到明顯擴增曲線，提示該檢測方法靈敏度及準確度高。
　　6.用已建立的實時熒光定量PCR法檢測2份臨床高度疑診百日咳的鼻咽拭子標本，均能看到擴增曲線，擴增片段送測序，測得的序列與美國生物技術(shù)信息中心（NCBI）GenBanK中已知序列進行Blast比較，結(jié)果同源性為100%，無堿基突變，

6、證實所檢樣本為BP，該方法檢測準確度高。
　　7.280例標本中明確病原感染的有219例，病原總檢出率78.2%（219/280），BP檢出率居首位47.9%（134/280），其次為RSV10.4%（29/280）、MP8.6%（24/280）、HPIV38.2%（23/280）、Adv7.1%（20/280）；其中單一病原感染的141例，混合感染的78例，所占比例分別為64.4%、35.6%，提示湖南地區(qū)兒童痙攣性咳嗽以單一病

7、原感染引起為主；混合感染的78份標本中，混合BP感染的59份，檢出率75.6%，其他病原混合感染的19份，檢出率24.4%，提示引起痙攣性咳嗽的混合感染病原中，以BP混合感染為主。BP混合感染的主要病原是ADV，檢出率4.98%，居首位，其次是BP+RSV2.71%，BP+fluA2.26%，BP+MP、BP+流感嗜血桿菌、BP+RHV各占1.81%。
　　8.回顧性分析75例BP單一感染患兒的臨床特征，結(jié)果發(fā)現(xiàn)BP檢出陽性的患兒

8、在各個年齡階段均有分布，但以2～4月的小嬰兒居多，而年齡≤12月的嬰幼兒普遍存在疫苗適齡未接種情況，以3～6月年齡段疫苗未接種率最高，達54.8%；百日咳在四季均有發(fā)病，以秋季發(fā)病率最高40.0%(30/75)，其次為夏季26.7%(20/75)、春季22.7%（17/75），冬季發(fā)病率最低10.7%(8/75)；BP感染的患兒臨床表現(xiàn)多樣，可見痙攣性咳嗽伴雞鳴樣吼聲、顏面憋紅、發(fā)紺、嘔吐等，76%的患兒出現(xiàn)咳時顏面憋紅,最常見；69.

9、3%的患兒夜間咳嗽多；伴隨癥狀包括發(fā)熱、喘息、流涕等，無明顯特異性。血常規(guī)示白細胞增多，以淋巴細胞增多為主，73.3%的患者白細胞計數(shù)≥10×109/L，且淋巴細胞百分比＞60%；70.7%的患兒肺部影像學呈現(xiàn)無異常和支氣管炎改變；12%的患兒在癥狀出現(xiàn)前21天內(nèi)接觸過咳嗽患者，接觸成員均為接觸密切的家庭成員；大環(huán)內(nèi)酯類藥用率達82.7%，81.3%的患兒出院時仍有痙咳。
　　9.將141例單純病原感染樣本中75例BP檢出陽性的納

10、入百日咳組，其他單一病原檢出陽性的納入非百日咳組，兩組進行臨床特征比較，兩組在性別分布上無顯著差異；兩組在年齡分布上均以2～4月齡患兒為多，≤12月年齡段百日咳組病原檢出率明顯高于非百日咳組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；兩組在總病程、疫苗未接種率、大環(huán)內(nèi)酯類藥物使用率上比較無統(tǒng)計學差異；兩組在咳時顏面憋紅、發(fā)紺、咳后雞鳴樣吼聲、夜間咳嗽、發(fā)熱、肺部聽診啰音及出院仍痙咳等特征上比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），百日咳組臨床痙攣性

11、咳嗽時多伴顏面憋紅、發(fā)紺、咳后雞鳴樣吼聲，以夜間咳多，很少伴有發(fā)熱及肺部啰音，出院時仍多有痙攣性咳嗽；百日咳組白細胞計數(shù)在15×109/L以上的占37.3%，淋巴細胞百分比集中在60～80%占69.3%，與非百日咳組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；百日咳組肺部影像學結(jié)果以支氣管炎改變居多,而非百日咳肺部影像學結(jié)果則以肺炎改變居多，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.成功建立百日咳桿菌的實時熒

12、光定量PCR檢測方法，為臨床診斷百日咳桿菌感染提供了新的快速檢測方法。
　　2.BP、RSV、MP、HPIV3及ADV是引起湖南地區(qū)兒童痙攣性咳嗽的常見病原體，其中BP占主要地位；
　　3.BP感染的患兒在年齡、季節(jié)、臨床表現(xiàn)等方面存在一定的特征性，且通常存在百日咳疫苗適齡未接種情況；
　　4.相對于其他病原所致的痙攣性咳嗽，百日咳桿菌感染的患兒臨床上年齡多≤12月，痙攣性咳嗽時多伴顏面憋紅、發(fā)紺或咳后雞鳴樣吼聲，以夜