髓源性免疫抑制細(xì)胞(MDSCs)和S100A8-A9在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎小鼠中(EAT)的表達(dá).pdf

1、目的：
　　橋本甲狀腺炎（Hashimoto’s thyroiditis, HT）是一種免疫細(xì)胞增殖浸潤，產(chǎn)生炎癥因子、特異性抗體，介導(dǎo)自身免疫攻擊的器官特異性自身免疫性疾病，現(xiàn)認(rèn)為其發(fā)病與免疫失衡相關(guān)，然而其確切機(jī)制尚未闡明。髓源性免疫抑制細(xì)胞（myeloid-derived suppressor cells， MDSCs）是一群具有多向免疫調(diào)節(jié)功能的髓系來源細(xì)胞，目前國際研究發(fā)現(xiàn)MDSCs可與S100A8/A9構(gòu)成一條自反饋的

2、回路，在腫瘤性疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，結(jié)合我們前期研究發(fā)現(xiàn)的HT患者甲狀腺中炎癥相關(guān)因子S100蛋白表達(dá)增加和外周血中MDSCs出現(xiàn)擴(kuò)增，我們推測：在HT中，MDSCs與S100A8/A9的表達(dá)均有升高，二者共同參與了HT的發(fā)病。我們將以實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎（experimental autoimmune thyroiditis，EAT）小鼠作為HT的動(dòng)物模型，檢測EAT小鼠外周血及脾臟中MDSCs的表達(dá)和亞型分布，分析血清及甲

3、狀腺組織中S100A8/A9的表達(dá)情況，并探討兩者的相關(guān)性，為HT發(fā)病機(jī)制的研究提供新思路。
　　方法：
　　1、建立EAT小鼠模型：用豬甲狀腺球蛋白和弗式佐劑免疫CBA/J小鼠誘發(fā)EAT小鼠，應(yīng)用蘇木素-伊紅染色觀察甲狀腺炎癥情況，并采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測小鼠血清中抗甲狀腺球蛋白抗體（Thyroglobulin antibody，TgAb）和抗甲狀腺過氧化物酶抗體（Thyroid peroxidase antibody

4、，TPOAb）的表達(dá)水平。
　　2、檢測MDSCs的表達(dá)頻率：采用流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠外周血及脾臟中MDSCs的表達(dá)及其亞群分布情況，并分析亞群細(xì)胞表面的髓系細(xì)胞相關(guān)抗原表達(dá)情況。
　　3、檢測S100A8，S100A9的表達(dá)水平：采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測小鼠血清中S100A8， S100A9表達(dá)水平，并采用免疫組織化學(xué)法檢測小鼠甲狀腺中S100A8蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、EAT模型的建立：?同對(duì)照

5、組相比，EAT組出現(xiàn)進(jìn)食量增多、排便量增多、體重進(jìn)行性下降，并呈易激惹狀態(tài)。?在普通光鏡下觀察兩組小鼠的甲狀腺，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組甲狀腺濾泡發(fā)育成熟，沒有炎細(xì)胞浸潤，而EAT組甲狀腺組織均出現(xiàn)不同程度的炎細(xì)胞浸潤和炎癥反應(yīng)。?EAT組血清中TgAb和TPOAb水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　2、小鼠外周血及脾臟中MDSCs表達(dá)頻率分析：EAT組外周血及脾臟中MDSCs不同亞群的比例均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

6、P<0.01）。
　　3、MDSCs亞型表面抗原分析：單核細(xì)胞亞型MDSCs（Monocytic-MDSCs, Mo-MDSCs）高表達(dá)Ly6C，不表達(dá)Ly6G，而粒細(xì)胞亞型MDSCs(Granulocytic-MDSCs, G-MDSCs)則同時(shí)表達(dá)Ly6C及Ly6G，但是Ly6C的表達(dá)水平明顯低于其在Mo-MDSCs中的表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　4、小鼠血清中S100A8、S100A9表達(dá)水平分析

7、：EAT組血清中S100A8，S100A9的表達(dá)水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），其中以S100A8升高更為明顯。
　　5、小鼠甲狀腺組織中S100A8蛋白表達(dá)情況：S100A8蛋白在EAT組甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的細(xì)胞漿、細(xì)胞核中均有表達(dá)，而在對(duì)照組的甲狀腺組織中未見表達(dá)。
　　6、S100A8、S100A9與MDSCs各亞群相關(guān)性分析：EAT組S100A8、S100A9的表達(dá)水平與G-MDSCs、Mo-MD

8、SCs的表達(dá)頻率未見明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　1、通過免疫CBA/J小鼠，成功建立EAT小鼠模型，該模型是研究HT的理想動(dòng)物模型。
　　2、MDSCs的兩個(gè)亞型Mo-MDSCs及G-MDSCs在EAT組中均明顯升高，以Mo-MDSCs升高更明顯，可能參與了HT的免疫致病過程。
　　3、Mo-MDSCs高表達(dá)Ly6C，不表達(dá)Ly6G，而G-MDSCs則同時(shí)表達(dá)Ly6C及Ly6G，但是Ly6C的表達(dá)水平明顯低于其