Smad3和Smad7在實驗性自身免疫性神經(jīng)炎中的動態(tài)表達.pdf

1、目的:吉蘭-巴雷綜合征(GBS)是一種以周圍神經(jīng)脫髓鞘和炎性細胞浸潤為特點的自身免疫性疾病,其病因和發(fā)病機制尚未完全闡明。實驗性自身免疫性神經(jīng)炎(EAN)是由CD4+T細胞介導(dǎo)的周圍神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病,因其與GBS有類似的臨床過程及免疫特點而成為研究GBS的理想模型。目前認為機體免疫平衡被打破、自身抗原特異性T細胞的產(chǎn)生是GBS/EAN發(fā)病的關(guān)鍵。
　　 轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)是TGF-β超家族的一種多效性免疫調(diào)節(jié)因

2、子,具有抑制T細胞增殖及分化的功能,在維持免疫穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。既往研究認為TGF-β1在GBS中為保護性因子,發(fā)揮免疫抑制作用。近年來Smads家族的發(fā)現(xiàn)為進一步研究TGF-β信號通路提供了廣闊的前景。Smads是TGF-β信號通路的一系列胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白。目前認為Smad7是TGF-β信號傳導(dǎo)通路的重要負性調(diào)控因子,而Smad2及Smad3是TGF-β1受體在胞漿最先作用的底物,Smad3的表達水平直接影響TGF-β1信號傳導(dǎo)。多項研

3、究表明炎癥性腸病、多發(fā)性硬化等自身免疫病中存在Smad3、Smad7分子的異常表達,伴TGF-β/Smads信號通路受損,提示Smad3、Smad7可能通過干擾TGF-β信號傳導(dǎo)參與多種自身免疫疾病的發(fā)病。
　　 本實驗旨在觀察smad3、smad7蛋白在EAN大鼠坐骨神經(jīng)中的動態(tài)表達,探討smad3及smad7與EAN的發(fā)病關(guān)系,為治療自身免疫性疾病提供新的治療靶點。
　　 方法:48只Lewis大鼠,雄性,SPF級,

4、6-8周,體重160-180g,隨機分為:生理鹽水組(n=4,4,4,4);完全弗氏佐劑組(n=4,4,4,4);EAN組(n=4,4,4,4)。建立EAN模型:首先制備抗原乳劑:大鼠用周圍神經(jīng)髓鞘蛋白P253-78以生理鹽水充分溶解后,再與完全弗氏佐劑(complete Freund'sadjuvant,CFA)充分混勻成抗原乳劑(P2終濃度為100ug/200uL)。生理鹽水組每只大鼠以200uL生理鹽水代替抗原乳劑注射;EAN組每

5、只老鼠注射200uL抗原乳劑;佐劑組大鼠注射生理鹽水和完全弗氏佐劑等體積混勻的乳劑200uL。免疫時間均為第O天,免疫部位為雙后肢足掌皮下。
　　 觀察實驗大鼠的發(fā)病情況及病理改變,分別在第7天,第16天,第24天,第33天處死動物,取坐骨神經(jīng)根行HE染色和Weil’s染色觀察其病理改變,采用western blot方法檢測Smad3、Smad7的蛋白表達水平。
　　 結(jié)果:
　　 1、在整個觀察期間,NS組和佐

6、劑組大鼠無癥狀,體重平穩(wěn)增長;EAN組大鼠在免疫后第11天開始發(fā)病,第17天癥狀達高峰,至第33天基本好轉(zhuǎn),臨床評分與NS組和佐劑組有顯著差異。
　　 2、與NS組及CFA組相比,EAN組大鼠Smad7蛋白表達在發(fā)病初期表達即升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,高峰期表達最高,到恢復(fù)期表達回落,但仍明顯高于CFA組、NS組。
　　 3、與NS組及CFA組相比,EAN組大鼠Smad3蛋白表達在發(fā)病各期表達均明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,