mGITRL促進小鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎的作用.pdf

1、目的：探討小鼠GITRL蛋白(mGITRL)在小鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎(EAT)發(fā)生發(fā)展過程中的作用,進一步研究其作用機制及其作為預防治療靶點的可能性。
　　 方法：⑴首先獲取小鼠甲狀腺球蛋白(mTg)和mGITRL蛋白,并純化和鑒定；⑵根據(jù)文獻,應(yīng)用小鼠甲狀腺球蛋白誘導CBA小鼠,建立小鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎(EAT)模型；⑶對EAT模型小鼠分組進行干預:尾靜脈分別注射mGITRL蛋白、對照蛋白(變性mGITRL)和P

2、BS；⑷ELISA法檢測各組小鼠血清中甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)水平和特異性；⑸對各組小鼠甲狀腺進行病理切片和HE染色,觀察甲狀腺病理變化情況；⑹檢測小鼠甲狀腺組織、局部淋巴結(jié)以及脾臟中Th17細胞的變化。
　　 結(jié)果：①成功建立了小鼠甲狀腺球蛋白誘導的小鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎EAT模型,EAT模型小鼠體內(nèi)檢測出自身甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)和甲狀腺組織可見淋巴細胞的浸潤；并且比較三組不同干預對EAT模型小鼠的作用結(jié)果發(fā)

3、現(xiàn):用mGITRL蛋白干預的EAT模型小鼠的自身甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)的水平和甲狀腺組織淋巴細胞的浸潤程度都比對照蛋白(變性mGITRL)和PBS干預組高。②對三組不同干預的EAT模型小鼠的脾臟淋巴細胞計數(shù)后發(fā)現(xiàn),與EAT組小鼠(8.50×107±1.40×107)和CTL-EAT組小鼠(8.75×107±2.25×107)相比,GITRL-EAT組小鼠用脾臟中細胞數(shù)目顯著性增加(1.13×108±2.40×107)；同時經(jīng)流式細

4、胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),小鼠脾臟中Th17細胞的比例,與EAT組小鼠(4.83％)和CTL-EAT組小鼠(4.79％)相比,GITRL-EAT組小鼠(6.96％)脾臟中Th17細胞的比例顯著性升高；小鼠頸部淋巴結(jié)中Th17細胞的比例,與EAT組小鼠(1.00％)和CTL-EAT組小鼠(1.28％)相比,GITRL—EAT組小鼠(1.92％)頸部淋巴結(jié)中Th17細胞的比例顯著性升高。③用qRT-PCR測定三組不同干預的EAT模型小鼠的甲狀腺組織中I

5、L-17表達發(fā)現(xiàn):GITRL-EAT組小鼠甲狀腺組織中IL-17表達量明顯高于CTL-EAT組和EAT組。
　　 結(jié)論：通過對小鼠甲狀腺球蛋白誘導的小鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎模型干預研究顯示,mGITRL蛋白增加了模型小鼠的自身甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)水平和甲狀腺組織的淋巴細胞浸潤,這就說明mGITRL蛋白可以加速并加重小鼠EAT的發(fā)病過程；mGITRL蛋白增加了模型小鼠的脾臟中Th17細胞的比例和甲狀腺組織中IL-17表