水稻花粉及精細胞優(yōu)勢表達基因遺傳轉化.pdf

1、本實驗室從水稻精細胞中克隆得到了3個在精細胞中優(yōu)勢表達的基因：PS66、RSSG58和RSSG8，并對他們開展了很多研究。本論文進一步展開對RSG6基因的研究工作，在遺傳轉化方面進行試驗，為揭示其生物學功能奠定基礎。另外，分離得到了水稻單核、二核與三核花粉，提取RNA用于基因芯片研究。以下為本論文主要研究內(nèi)容： 1．以水稻中花11號成熟胚為材料，誘導愈傷組織分化成苗，建立了一個較高效。率的水稻愈傷組織再生系統(tǒng)，愈傷組織出苗率為8

2、9.6％，明顯高于已報道的愈傷組織出苗率為81.7％的結果。同時對愈傷組織與再生苗的(G-418耐受性做了試驗，50mg/L的G-418即可抑制愈傷組織與小苗的生長，可使用此濃度篩選轉基因植株。用農(nóng)桿菌介導法將包含有RSG6反義基因的pBin19-ran質粒轉入水稻愈傷組織中，誘導分化，得到了抗性小苗。 2．以水稻花穗為原材料，采用過濾結合蔗糖密度梯度離心的方法，分離得到純 度較高的單核、二核和三核花粉。所得單核、二核及三核花

3、粉純度分別為 95.2％、90.3％和97.60／，高活力花粉的所占的比率依次為60.3％、86.7％和 92.3％。分離到的花粉用Rneasy Plant Mini Kit提取得到了高質量的RNA，已用于基因芯片分析水稻花粉優(yōu)勢表達基因；分離得的花粉還可以繼續(xù)培養(yǎng)，作為細胞生物學研究的材料，來對水稻花粉進行研究。 3．本實驗室已經(jīng)對水稻精細胞優(yōu)勢表達基因RSG6開展了很多研究。為了進一步了解RSG6在體外的表達情況，將其閱

4、讀框連入雙元載體pB121中，由35s啟動子調控基因。用農(nóng)桿菌浸染法將重組質粒轉入擬南芥中。卡那霉素篩選抗性植株，得到抗性植株并培養(yǎng)收耿第二代種子，以用于進一步的實驗。為了解RSG6的整合和表達情況和推測RSG6基因的功能奠定了基礎。 將mGFP4閱讀框與RSG6閱讀框一起連入載體pBl221中，構建融合蛋白瞬時表達載體，轉入大腸桿菌進行擴增。大量提取此重組質粒后，用PEG介導法將此重組質粒轉入擬南芥原生質體中。試圖通過熒光蛋白的指示