甘蔗eEF1A基因表達(dá)及遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、eEF1A（eukaryotic elongation factor1 A）是真核細(xì)胞內(nèi)主要的翻譯因子，不僅將GTP和氨?；鵢tRNrA運(yùn)至核糖體上，催化氨基酸鏈的延伸而推動(dòng)、控制蛋白質(zhì)的合成，在細(xì)胞中還發(fā)揮著許多作用，參與細(xì)胞生長、應(yīng)激反應(yīng)及運(yùn)動(dòng)性有關(guān)的信號傳導(dǎo)。在本課題組拼接獲得甘蔗eEF1A基因cDNA全長的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步進(jìn)行甘蔗eEF1A的表達(dá)和功能的研究，取得以下結(jié)果：
　　 1．Southern雜交證明甘蔗eEF1A

2、在甘蔗基因組中確實(shí)存在，并且是多拷貝基因。
　　 2．Northern雜交表明甘蔗eEF1A只在甘蔗未成熟莖段有高水平表達(dá)，在正在成熟莖段和已成熟莖段低水平表達(dá)，并且乙烯利處理可以誘導(dǎo)eEF1A在未成熟莖段持續(xù)高效表達(dá)。
　　 3．采用RT-PCR方法克隆了1420bp的甘蔗eEF1A編碼區(qū)cDNA片段，反向插入植物表達(dá)載體pBI121的CaMV35S啟動(dòng)子和GUS報(bào)告基因之間，構(gòu)建了以NPTⅡ基因?yàn)榭剐赃x擇標(biāo)記的eEF

3、1A基因反義植物表達(dá)載體。
　　 4．通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)系統(tǒng)成功將反義eEF1A基因遺傳轉(zhuǎn)化煙草K346（Nicotiana tobaccum L．），獲得34株轉(zhuǎn)基因植株。反義轉(zhuǎn)基因煙草移栽后，表現(xiàn)出生長緩慢、葉數(shù)減少、株高變矮、開花延遲的現(xiàn)象及植物體內(nèi)總蛋白質(zhì)含量降低，并出現(xiàn)了兩種變異類型。初步證實(shí)甘蔗eEF1A在煙草中的反義表達(dá)，能夠抑制部分煙草內(nèi)源eEF1A基因的活力。推測轉(zhuǎn)反義eEF1A基因煙草形態(tài)的變化與eEF1A的表達(dá)