ipt基因表達(dá)載體的構(gòu)建及其水稻遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、植物葉片衰老是葉片發(fā)育的最后階段。葉片衰老過程有著很重要的實(shí)際價值，因?yàn)楫?dāng)葉片衰老進(jìn)行時，植物的營養(yǎng)成分可以轉(zhuǎn)運(yùn)到植物其它的生長部位，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)得以再利用。然而在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，葉片衰老會帶來不利影響，它將極大地限制作物產(chǎn)量潛力的發(fā)揮。
　　水稻生育后期葉片過早衰老，導(dǎo)致同化能力降低，制約著水稻產(chǎn)量的進(jìn)一步提高，細(xì)胞分裂素是一種重要的延緩植物葉片衰老進(jìn)程的植物激素，ipt基因是細(xì)胞分裂素生物合成的關(guān)鍵酶基因，將葉片衰老特異表達(dá)的啟動子

2、PSAG12與ipt基因融合構(gòu)成嵌合基因后再導(dǎo)入水稻中，可以特異性地提高轉(zhuǎn)基因水稻體內(nèi)的細(xì)胞分裂素水平，從而有效地延緩水稻葉片的衰老，為提高水稻的產(chǎn)量探索一條新的途徑。
　　本研究克隆了ipt基因及啟動子PSAG12，并構(gòu)建了適合水稻轉(zhuǎn)化的表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將其導(dǎo)入水稻并進(jìn)行相應(yīng)的分子檢測，主要研究結(jié)果如下：
　　1．以根癌土壤農(nóng)桿菌C58 Ti質(zhì)粒為模板，采取PCR方法，克隆了ipt基因，序列測定結(jié)果表明，插入片段

3、全長723bp，包含了該基因完整的編碼閱讀框，與發(fā)表的ipt基因核苷酸同源性為100％（AE009419）。
　　2．根據(jù)已知的PSAG12啟動子序列設(shè)計引物，成功從擬南芥基因組中克隆SAG12基因5’側(cè)翼1522bp啟動子區(qū)域，與 GenBank上公布的SAG12基因（ATU37336）的上游序列有99%的核苷酸序列同源性。
　　3．通過一系列的酶切、電泳、目的片斷的回收過程，將ipt基因和PSAG12啟動子克隆到雙元表達(dá)