脫氧膽酸通過(guò)調(diào)節(jié)干細(xì)胞重編程因子OCT4與SOX2誘導(dǎo)食管鱗狀上皮腸化生.pdf

1、背景和目的：Barrett食管（Barrett’s esophagus，BE）是指食管下段鱗狀上皮被化生的柱狀上皮所取代的一種病理現(xiàn)象，目前普遍認(rèn)為BE是食管腺癌（ECA）的主要癌前病變。近年來(lái)全世界尤其是西方國(guó)家食管腺癌及BE的發(fā)病率增加，BE的研究受到廣泛重視。Barrett食管的細(xì)胞來(lái)源尚不清楚，目前主要存在轉(zhuǎn)定型（Transcommitment）和轉(zhuǎn)分化（Transdifferentiation）兩類假設(shè)，但這些假設(shè)都因缺乏直接

2、證據(jù)而不能完全讓人信服。近10年來(lái)，誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的提出及運(yùn)用使得轉(zhuǎn)分化學(xué)說(shuō)越來(lái)越受重視。BE一直被認(rèn)為是胃食管反流病（GERD）的并發(fā)癥，在胃食管反流人群中BE的檢出率高達(dá)10％-15%。結(jié)合之前有研究證實(shí)膽汁成分中非結(jié)合膽汁酸脫氧膽酸（DCA）是導(dǎo)致BE發(fā)生及癌變的重要成分，我們提出：DCA等刺激可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞重編程因子OCT4及SOX2的表達(dá)導(dǎo)致成熟食管鱗狀上皮細(xì)胞逆分化為具有部分分化潛能的細(xì)胞，再在環(huán)境因素的作用下轉(zhuǎn)分化形成柱

3、狀上皮，進(jìn)而形成 BE。本課題的目的是研究脫氧膽酸對(duì)正常食管鱗狀上皮中OCT4及SOX2表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討其在BE發(fā)生中的作用及機(jī)制，為尋找BE診斷和治療的新靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.在臨床標(biāo)本及通過(guò)胃全切+食管十二指腸吻合的方法構(gòu)建的大鼠單純膽汁反流模型中通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)正常食管、食管炎及BE中OCT4、SOX2及腸型標(biāo)記分子Cdx2、MUC2及鱗狀上皮標(biāo)記分子p63表達(dá)水平；
　　2.用200

4、μmol/L的脫氧膽酸（DCA）分別處理Het-1A細(xì)胞0h、2h、4h、8h、12h，采用Real-time PCR、Western Blot等方法研究DCA對(duì)食管上皮細(xì)胞OCT4、SOX2、腸型標(biāo)記分子Cdx2、MUC2及鱗狀上皮標(biāo)記分子p63表達(dá)的影響；
　　3.用慢病毒過(guò)表達(dá)及RNAi干擾的方法上調(diào)或下調(diào)Het-1A細(xì)胞中OCT4、SOX2的表達(dá)水平，觀察其對(duì)DCA誘導(dǎo)腸標(biāo)記分子Cdx2、MUC2的影響以及OCT4、SOX

5、2在DCA誘導(dǎo)食管腸上皮化生中的作用；
　　4.觀察Het-1A細(xì)胞中OCT4表達(dá)調(diào)控對(duì)SOX2表達(dá)的影響及SOX2表達(dá)調(diào)控對(duì)OCT4表達(dá)的影響，探討食管鱗狀上皮細(xì)胞中OCT4與SOX2的相互關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.人體標(biāo)本中，正常食管上皮OCT4不表達(dá)，少量食管炎中OCT4呈微弱核表達(dá)，Barrett腺體及周邊鱗狀組織OCT4表達(dá)較正常食管及食管炎組織明顯升高。正常食管、食管炎、BE中SOX2表達(dá)逐漸下調(diào)；

6、>　　2.臨床標(biāo)本中，BE中腸型標(biāo)記分子Cdx2、MUC2表達(dá)較正常食管、食管炎上調(diào)，鱗狀上皮標(biāo)記分子p63表達(dá)下調(diào)；
　　3.通過(guò)胃全切+食管十二指腸吻合術(shù)成功構(gòu)建了單純膽汁反流的大鼠模型成功誘導(dǎo)了BE形成。大鼠模型中OCT4、SOX2及腸型標(biāo)記分子Cdx2、MUC2及鱗狀上皮標(biāo)記分子p63表達(dá)與人體標(biāo)本一致；
　　4.體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)DCA處理能夠時(shí)間依賴性地上調(diào)鱗狀上皮細(xì)胞中OCT4的表達(dá)同時(shí)下調(diào)SOX2表達(dá)，并且DCA處

7、理能誘導(dǎo)腸型標(biāo)記分子Cdx2、MUC2的表達(dá)；
　　5.干擾OCT4后腸型標(biāo)記分子下調(diào)趨勢(shì)，OCT4干擾削弱了DCA處理對(duì)腸型標(biāo)記分子的上調(diào)作用。單獨(dú)過(guò)表達(dá)OCT4并不足以誘導(dǎo)Cdx2、MUC2的表達(dá)；
　　6.干擾掉SOX2后腸型標(biāo)志Cdx2及MUC2上調(diào)，并且對(duì)DCA誘導(dǎo)腸型分化表現(xiàn)出協(xié)同作用，過(guò)表達(dá)SOX2會(huì)導(dǎo)致腸型標(biāo)志物表達(dá)下調(diào)；
　　7.干擾或過(guò)表達(dá)OCT4未影響SOX2表達(dá)變化，同樣干擾或過(guò)表達(dá)SOX2也未