PSA-NCAM調(diào)控細(xì)胞增殖機(jī)理的研究.pdf

1、神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)是一種屬于免疫球蛋白超家族的糖蛋白。在脊椎動(dòng)物中，多聚唾液酸（Polysialic Acid，PSA）是唾液酸以α-2,8連接聚合成的鏈狀聚合物修飾在NCAM上。PSA是一種高度親水的聚合物，除了可通過空間位置影響細(xì)胞胞外基質(zhì)蛋白之間的粘附外，并可調(diào)控同源或異源、自體或其它蛋白間的相互作用介導(dǎo)的胞內(nèi)信號(hào)通路。PSA對(duì)NCAM糖基化的動(dòng)態(tài)調(diào)整，對(duì)NCAM介導(dǎo)發(fā)育過程中腦回路的正確形成，突觸可塑性，學(xué)習(xí)和記憶有重

2、要的影響。
　　本文利用在噬菌體中提取的解聚酶內(nèi)源性乙酰-神經(jīng)氨酸苷酶（Endo-N-Acetylneuraminidase，EndoN）來降解神經(jīng)細(xì)胞表面的NCAM的多聚唾液酸;研究去除多聚唾液酸后，NCAM介導(dǎo)的胞內(nèi)信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)可能帶來的影響。所用的細(xì)胞株為PSA-NCAM陽性的鼠嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞和人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞，及PSA陰性的大鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤C6細(xì)胞(PSA-,NCAM+)和小鼠L929成纖維細(xì)

3、胞(PSA-,NCAM-)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示加入EndoN至PSA陽性細(xì)胞(PC12,SH-SY5Y)孵育后可成功去除細(xì)胞表面的NCAM上的PSA，PSA去除后細(xì)胞的增殖受到抑制，處于G1期的細(xì)胞數(shù)目明顯增多。而EndoN對(duì)PSA陰性細(xì)胞(C6,L929)及失活的EndoN對(duì)PSA陽性細(xì)胞，則沒上述影響。EndoN孵育對(duì)在G1過渡至S期過程中起關(guān)鍵作用的周期素依賴性激酶2(CDK2)蛋白表達(dá)量無影響，但是降低其酶活力。通過蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)和

4、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)分析發(fā)現(xiàn)是由于周期蛋白依賴性激酶抑制因子p21Cip1/Waf1表達(dá)量增加，進(jìn)而抑制CDK2酶活力，使細(xì)胞周期停滯在G1期。抑制MAPK信號(hào)通路中的ERK可完全消除EndoN所造成的細(xì)胞增殖抑制、p21Cip1/Waf1的蛋白表達(dá)上調(diào)、和CDK2酶活抑制，說明移除PSA后，NCAM通過ERK-MAPK通路調(diào)控細(xì)胞周期。加入成纖細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（Fibroblast growth factor receptor，F(xiàn)GFR）