不同藥物聯(lián)合預(yù)防泛影葡胺誘導(dǎo)急性腎損傷的機制研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　對比劑誘導(dǎo)的急性腎損傷（contrast-induced acute kidney injury，CIAKI)，又被稱之為對比劑腎病（contrast induced nephropathy，CIN），是應(yīng)用對比劑后發(fā)生的重要的臨床并發(fā)癥，它是行經(jīng)皮冠狀動脈介入治療后繼支架內(nèi)血栓、支架內(nèi)再狹窄后的第三大并發(fā)癥。
　　臨床應(yīng)用的對比劑主要包括泛影葡胺、碘佛醇、碘海醇等。CIAKI的發(fā)病機制十分繁雜。有研究

2、表明，在 CIAKI中腎小管損傷中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激而誘導(dǎo)的細胞凋亡發(fā)揮重要作用。已有研究推測，阿托伐他汀、普羅布考與前列地爾藥物的抗氧化與抗炎或改善腎血管灌注作用可抑制腎小管細胞凋亡，均可能預(yù)防CIAKI的發(fā)生。此前已有研究顯示阿托伐他汀可成功抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細胞凋亡作用從而預(yù)防 CIAKI的發(fā)生。然而，該聯(lián)合用藥是否可通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細胞凋亡作用進而預(yù)防CIAKI的發(fā)生尚無具體研究。
　　近幾十年的研究發(fā)現(xiàn)許多可檢測 C

3、IAKI的早期新型標記物，此前已有研究初步證明叢生蛋白可預(yù)測CIAKI的發(fā)生，但缺乏進一步的論證。
　　因此，本研究擬用泛影葡胺建立大鼠CIAKI模型，通過不同藥物聯(lián)合干預(yù)，比較藥物聯(lián)合與阿托伐他汀單藥對大鼠對比劑腎損傷的影響，檢測各種藥物聯(lián)合是否通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激特有分子伴侶進而探討其可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細胞凋亡從而發(fā)揮其對 CIAKI后的腎功能的保護作用，并從藥物聯(lián)合角度進一步間接明確叢集素在CIAKI發(fā)生中的診斷意義及不同

4、藥物聯(lián)合對其干預(yù)作用。
　　研究方法：
　　Wistar大鼠50只，隨機分成5組：A組（阿托伐他汀組，n=10）；P組（普羅布考+阿托伐他汀組，n=10）；Q組（前列地爾+阿托伐他汀組，n=10）；NC組（對比劑組，n=10）；N組（對照組，n=10）。
　　常溫下適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，1周末鎖骨下靜脈取血2ml測腎功能。予P組普羅布考灌胃14天后與阿托伐他汀同時灌胃10天。Q組與A組等體積0.5％羧甲基纖維素鈉灌胃14天

5、后，改用阿托伐他汀灌胃10天，N組與NC組每天等體積0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃。灌胃21天后，第22天開始自鎖骨下靜脈注射泛影葡胺，N組注射生理鹽水；Q組分別于注射對比劑前24小時、術(shù)前30分鐘、術(shù)后24小時鎖骨下靜脈注射前列地爾，其他組等劑量生理鹽水鎖骨下靜脈注射，術(shù)后繼續(xù)灌胃直至處死。
　　分別于注射對比劑后48小時及72小時取血2ml測腎功能，72小時后處死大鼠，取出腎臟，左腎用福爾馬林固定，石蠟包埋送往病理科。右腎置于

6、-80度液氮冰箱冷凍保存用于western blot及real-time RT-PCR實驗。
　　腎臟病理切片HE染色法及電鏡下檢測腎臟病理變化，用TUNEL染色法檢測腎臟細胞凋亡。western blot及免疫組化檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激靶點GRP78、Clusterin、GADD153/CHOP、Caspase-12在蛋白水平上的表達，real-time RT-PCR檢測上述靶點在核酸水平的表達。
　　統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS19.0

7、統(tǒng)計軟件。以均值±標準差（-χ±s）衡量計量資料數(shù)值，配對樣本t檢驗方法比較組內(nèi)數(shù)據(jù)；單因素方差分析法、Mann-Whitney U檢驗或Kruksal-Wallis檢驗比較組間數(shù)據(jù)。P﹤0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　研究結(jié)果：
　　1、泛影葡胺能引起大鼠腎功能肌酐指標明顯增高，NC組造模前后差異值最大。阿托伐他汀組及聯(lián)合普羅布考或前列地爾組肌酐升高值較對比劑組明顯降低，聯(lián)合用藥組與空白組無明顯差異，其中Q組對腎保護作

8、用明顯好于阿托伐他汀單藥組。
　　2、NC組GRP78、GADD153/CHOP及Caspase-12核酸表達水平最高，其中在GADD153/CHOP及Caspase-12的表達與其余四組相比有明顯統(tǒng)計學差異；而對于聯(lián)合用藥及單藥組之間的比較無明顯統(tǒng)計學差異。
　　3、Western blot實驗中NC組GRP78、GADD153及Caspase-12蛋白表達量較其他四組顯著升高，A組在 GRP78靶點蛋白表達量明顯高于 P

9、組，在GADD153明顯高于聯(lián)合用藥組，在Caspase-12高于Q組。在GADD153和Caspase-12的表達Q組蛋白表達量明顯低于P組，聯(lián)合用藥組在以上靶點的表達接近于N組甚至低于N組。
　　4、在病理HE染色及電鏡中，NC組中腎小管上皮細胞空泡樣改變，部分上皮細胞壞死、基底膜增厚，腎小管腔狹窄，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體數(shù)量減少、發(fā)生腫脹，管腔面微絨毛雜亂脫落；而阿托伐他汀組及聯(lián)合用藥組腎小管損傷程度較對比劑組減輕，聯(lián)合用藥組病例損

10、傷程度低于阿托伐他汀組。
　　5、凋亡指數(shù)：NC組＞A組＞Q組＞P組＞N組，差異有統(tǒng)計學意義，其中A組較聯(lián)合用藥組顯著升高。P組與Q組無明顯差異。
　　6、免疫組化：NC組GRP78、GADD153、Caspase-12表達量最高，A組在GRP78的表達上略高于聯(lián)合用藥組，無明顯統(tǒng)計學差異，在GADD153的表達上高于聯(lián)合用藥組，與Q組有明顯差異，在Caspase-12表達上與P組和Q組有明顯差異。
　　7、叢集素核酸

11、表達五組間未見明顯差異。NC組在蛋白表達水平明顯高于其他四組，A組也顯著高于聯(lián)合用藥組，Q組低于P組的表達。
　　研究結(jié)論：
　　1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細胞凋亡通路在泛影葡胺誘導(dǎo)的急性腎損傷的發(fā)病中發(fā)揮了作用；阿托伐他汀、普羅布考及前列地爾對大鼠 CIAKI的發(fā)病起到預(yù)防作用，這種作用可能是通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細胞凋亡通路而實現(xiàn)的，其中普羅布考、前列地爾與阿托伐他汀聯(lián)合對對比劑腎損傷的腎保護作用可能優(yōu)于阿托伐他汀組，前列地