PGRN在膿毒癥誘導(dǎo)的急性腎損傷中的功能研究.pdf

1、膿毒癥是一種由感染引起的，以全身性炎癥反應(yīng)為特征的復(fù)雜的臨床綜合征。膿毒癥通常導(dǎo)致廣泛的組織損傷和多器官功能紊亂。急性腎損傷(acute kidneyinjury，AKI)是膿毒癥最常見的并發(fā)癥之一，不僅增加了疾病的復(fù)雜性和護(hù)理費(fèi)用，也是引起膿毒癥相關(guān)死亡的高風(fēng)險(xiǎn)因素。膿毒癥誘導(dǎo)的AKI的病理學(xué)機(jī)制十分復(fù)雜，涉及腎臟內(nèi)血流動(dòng)力學(xué)變化、內(nèi)皮細(xì)胞失調(diào)、腎實(shí)質(zhì)組織的炎性細(xì)胞浸潤、腎小球血栓和壞死細(xì)胞與碎片引起的腎小管障礙等多種因素。
　

2、　Progranulin(PGRN)是一種新型的分泌生長因子，在快速增殖的上皮細(xì)胞和特定類型的神經(jīng)細(xì)胞中高表達(dá)，多種其他組織和細(xì)胞類型中也存在PGRN表達(dá)，包括脂肪組織、造血細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及免疫細(xì)胞等。PGRN具有多種生理功能，不僅維持和調(diào)控正常組織的發(fā)生發(fā)展、增殖、再生及宿主防御，也參與多種類型的疾病過程，包括自身免疫性疾病、癌癥和神經(jīng)退行性疾病等。近年來，PGRN在炎癥方面的作用受到廣泛關(guān)注，另有研究報(bào)道，PGRN在腎缺血/再灌注小

3、鼠模型中具有腎臟保護(hù)作用。膿毒癥是急性腎損傷最主要的病因之一，而PGRN在膿毒癥誘導(dǎo)的急性腎損傷中的作用尚不明確。
　　本文利用兩種常用的膿毒癥相關(guān)急性腎損傷研究模型:LPS腹腔注射誘導(dǎo)內(nèi)毒素血癥和盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)誘導(dǎo)多細(xì)菌感染建立膿毒癥小鼠模型，初步探討PGRN在膿毒癥誘導(dǎo)的急性腎損傷中的功能。
　　目的:明確PGRN在膿毒癥相關(guān)的急性腎損傷中的作用，并探討PGRN對膿毒癥相關(guān)腎損傷中腎組織炎癥應(yīng)答與腎小管上皮細(xì)胞死亡的影響

4、。
　　方法:分別使用小鼠腹腔注射細(xì)菌脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)和小鼠盲腸結(jié)扎再穿孔(cecal ligation and puncture，CLP)的方法，構(gòu)建膿毒癥模型。在建模6小時(shí)和24小時(shí)后，使用實(shí)時(shí)定量PCR檢測腎組織中PGRN的mRNA水平，Western blot和免疫組化檢測PGRN的蛋白表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELI

5、SA)檢測血清與腎組織勻漿中PGRN的蛋白水平;在建模2小時(shí)前，野生型鼠外源性注射rPGRN和無菌PBS，其他野生型鼠和PGRN基因敲除鼠直接建模，為了檢測膿毒癥誘導(dǎo)的腎損傷的程度，血生化分析法檢測血清中肌酐和尿素氮含量，H&E染色法檢測腎組織的損傷;免疫組化法檢測腎組織中中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤;實(shí)時(shí)定量PCR法檢測腎組織炎性細(xì)胞因子的mRNA水平;TUNEL法檢測腎組織細(xì)胞的凋亡;Western blot檢測腎組織中凋亡蛋白的表達(dá)水

6、平。
　　結(jié)果:在兩種膿毒癥小鼠模型研究中，本研究發(fā)現(xiàn)膿毒癥小鼠腎組織中PGRN的蛋白水平和mRNA水平均高于對照組小鼠;與野生型鼠相比，PGRN基因敲除的膿毒癥小鼠的血清中肌酐和尿素氮水平更高;H&E染色顯示腎組織損傷更加嚴(yán)重;中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤更加嚴(yán)重;促炎細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA水平升高;腎組織細(xì)胞凋亡更顯著，凋亡蛋白的表達(dá)水平升高;而與注射PBS組相比，外源性注射rPGRN組，小鼠腎功能障礙

7、和腎組織損傷均明顯減輕;注射rPGRN能夠有效抑制腎組織中炎癥應(yīng)答及腎小管上皮細(xì)胞的凋亡性死亡。
　　結(jié)論:PGRN在膿毒癥小鼠腎組織及外周血中表達(dá)水平升高;PGRN敲除導(dǎo)致膿毒癥相關(guān)急性腎損傷更加嚴(yán)重;而外源性注射重組PGRN后腎損傷明顯改善。
　　本研究采用野生型與PGRN基因敲除小鼠或外源注射rPGRN等方法，利用LPS注射和CLP膿毒癥小鼠模型，明確了PGRN對膿毒癥相關(guān)急性腎損傷的保護(hù)性作用，并從炎癥應(yīng)答和腎臟實(shí)質(zhì)