腎胺酶在輸尿管急性梗阻致急性腎損傷的機(jī)制探討.pdf

1、腎胺酶（renalase，RNLS），主要是由腎小管上皮細(xì)胞合成和分泌的蛋白質(zhì)。目前有關(guān)腎胺酶的研究主要集中其在心血管、慢性腎功能不全和糖尿病等疾病的作用。其能夠降解循環(huán)中的兒茶酚胺類，降低血壓及心率的作用，此外其還與多種缺血損傷疾病相關(guān)，如缺血性腦卒中、急性心肌梗死和缺血性急性腎損傷中，循環(huán)中的腎胺酶水平不足。然而作用機(jī)制尚未完全闡明，腎胺酶是通過酶降解的機(jī)制降解兒茶酚胺，還是作為細(xì)胞因子參與細(xì)胞的信號(hào)狀態(tài)通路調(diào)控。目前，急性腎損傷的

2、高發(fā)病率及不良預(yù)后都亟須我們尋找有效的防治手段，在我國結(jié)石導(dǎo)致的腎后性急性損傷的發(fā)病率較高。目前RNLS在輸尿管急性梗阻導(dǎo)致的急性腎損傷的作用機(jī)制尚未見報(bào)道。
　　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)研究予RNLS干預(yù)，從炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡角度觀測其對雙側(cè)輸尿管急性梗阻24小時(shí)所致的急性損傷的作用。通過觀測腎小管病理損傷情況及炎癥細(xì)胞浸潤情況、丙二醛（Maleic Dialdehyde，MDA）、促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-

3、2和TUNEL水平的變化，進(jìn)一步探討RNLS在雙側(cè)輸尿管急性梗阻導(dǎo)致的急性腎損傷的機(jī)制及其保護(hù)機(jī)制。
　　方法：
　　用南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的健康雄性SD大鼠36只，體重在160-200g之間。動(dòng)物倫理通過廣州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物倫理審查委員會(huì)審核批準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)在廣州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心完成。室溫維持在19℃-24℃，相對濕度為45％～70％，用蛋白質(zhì)比例為2l％的標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)，自由飲水。正式實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)7天。大鼠隨機(jī)分成三

4、組：A組（shame組，n=12只）、B組（BUO24小時(shí)+生理鹽水組，n=12只）、C組（BUO24h+RNLS組，n=12只）。采用雙側(cè)輸尿管結(jié)扎復(fù)制急性梗阻性急性腎損傷模型， BUO+RNLS組在造模前腹腔注射人重組RNLS1mg/kg，BUO+vehicle組在造模前予等體積的溶媒生理鹽水腹腔注射。急性梗阻24小時(shí)后處死大鼠，檢測血漿肌酐、尿素氮，TBA法檢測血漿丙二醛（MDA）水平，采用光學(xué)顯微鏡觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)改變，免疫組

5、化法檢測大鼠促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，TUNEL檢測腎臟組織細(xì)胞凋亡的情況。
　　結(jié)果：
　　腎功能：shame組的腎功能沒有改變，雙側(cè)輸尿管急性梗阻24小時(shí)后， BUO+vehicle組大鼠血清肌酐和尿素氮上升最高，與BUO+RNLS組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。2、血清丙二醛的水平比較：A、B和C三組的MDA水平都有升高，BUO+vehicle組MDA水平最高，其次是BUO+RNLS組，s

6、hame組的水平最低，三組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。3、光鏡觀察腎臟組織的病理學(xué)改變：shame組腎臟組織未見異常改變，小球及小管均正常。BUO+vehicle組球囊比例增大，腎小管上皮細(xì)胞變性，腎小管擴(kuò)展，管型形成，間質(zhì)可見炎癥細(xì)胞浸潤。BUO+RNLS組的病理改變較 BUO+vehicle組輕。4、免疫組化及TUNEL檢測：促凋亡蛋白 Bax表達(dá)中，BUO+vehicle組的表達(dá)最多，其次是BUO+RNLS組，shame組的

7、表達(dá)也有少量表達(dá)。三組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)中，由高到少分別是BUO+RNLS組、BUO+vehicle組和shame組。三組表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。TUNEL檢測結(jié)果為BUO+vehicle組的陽性細(xì)胞最多，其次是BUO+RNLS組，shame組未見凋亡細(xì)胞。三組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、RNLS可改善腎功能，減輕病理損傷，對急性梗阻致急