Cxcl6基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中的表達.pdf

1、目的：研究Cxcl6基因在大鼠睪丸組織中的轉(zhuǎn)錄與表達情況。
　　方法：（1）研究對象：Wistar雄性大鼠2、4、6、8、10、12、14、15、16、20、25、29、30、31、35、40、45、50、55、60、65日齡。（2）將Wistar雄鼠和雌鼠合籠（從內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物中心購買，清潔級，標準飼料，在內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)實驗樓飼養(yǎng)，記錄鼠出生的具體時間，出生當(dāng)天計第一天）。（3）取2-65日齡Wistar雄性大鼠。脊椎脫

2、臼法處死不同時間點的雄性大鼠，取睪丸組織。每個時間點3只不同窩別的大鼠。（4）睪丸組織提取總RNA及總蛋白，濃度測定及純度檢測。采用總RNA提取試劑盒及全蛋白提取試劑盒，紫外分光光度計測量RNA純度及濃度。（5）RNA反轉(zhuǎn)成cDNA。（6）采用鏈霉菌抗生物素-過氧化酶連接（SP）免疫組織化學(xué)方法檢測GCP-2蛋白在大鼠睪丸組織中的表達情況。（7）采用Real-time PCR檢測大鼠睪丸組織中Cxcl6mRNA的轉(zhuǎn)錄情況。
　　結(jié)

3、果：提取2-65日齡的雄性Wistar大鼠總RNA及總蛋白。在mRNA水平，Cxcl6基因在大鼠出生后2-65天mRNA表達模式：出生后第2天開始緩慢下降，到第10天達到最低值，一直持續(xù)到第20天，從第20天開始迅速線性上升，29天達到最高值，然后開始下降，第35天下降到最低值后開始上升，上升到第45天又開始下降，第65天達到最低值。其中29日齡大鼠睪丸組織Cxcl6mRNA表達最高。在蛋白水平，免疫組化結(jié)果顯示Cxcl6在大鼠早期發(fā)育