HPV16 E2與Daxx相互作用對細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：通過研究人乳頭瘤病毒16型（HPV16）E2蛋白與Daxx在人急性單核細胞性白血病細胞（THP-1）和人宮頸癌細胞（C-33A）中的相互作用及其對細胞凋亡的影響，為進一步闡明HPV16 E2蛋白在HPV16致癌中的作用及其機制奠定試驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　(1)將重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/HPV16 E2瞬時轉(zhuǎn)染C-33A、THP-1細胞，通過間接免疫熒光試驗分析HPV16 E2和Daxx蛋白在兩種細胞內(nèi)的分布

2、與定位。
　　(2)將重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/HPV16 E2瞬時轉(zhuǎn)染C-33A細胞，通過免疫共沉淀和Western blot檢測HPV16 E2蛋白與Daxx蛋白在細胞內(nèi)的相互作用。
　　(3)將重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/HPV16 E2瞬時轉(zhuǎn)染或與重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/Daxx共轉(zhuǎn)染 C-33A、THP-1細胞，通過qRT-PCR或Western blot分別檢測Daxx基因或Daxx蛋白在細胞內(nèi)

3、的表達水平。
　　(4)將重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/HPV16 E2瞬時轉(zhuǎn)染C-33A、THP-1細胞12h、24h、36h、48h，經(jīng)MTT染色后，C-33A細胞檢測OD490值，THP-1細胞檢測OD570值，并計算兩種細胞的增殖抑制率；采用流式細胞術(shù)測定細胞周期各時相比率和細胞凋亡率。
　　結(jié)果：
　　(1)在倒置熒光顯微鏡下，觀察到顯紅色信號的HPV16 E2蛋白與顯綠色信號的Daxx蛋白均分布于C-33

4、A、THP-1細胞核，兩種信號融合后成黃色信號。
　　(2)免疫共沉淀及Western blot檢測到HPV16 E2蛋白與Daxx蛋白在C-33A細胞內(nèi)有相互作用。
　　(3)HPV16 E2瞬時高表達時，在C-33A、THP-1細胞內(nèi)，Daxx基因水平及蛋白質(zhì)表達水平均升高；共轉(zhuǎn)染質(zhì)粒HPV16 E2和Daxx后，兩種蛋白質(zhì)表達量均增加。
　　(4)HPV16 E2瞬時高表達時，與對照組相比，C-33A、THP-1