促甲狀腺激素對男性骨代謝的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥在中老年人群中發(fā)病率越來越高，但其具體的發(fā)病機(jī)制仍未十分明確。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，促甲狀腺激素(TSH)可能直接影響骨代謝。本研究總共分為兩部分:臨床分析及體外實(shí)驗(yàn)，針對TSH對男性骨代謝的影響及其進(jìn)一步作用于成骨細(xì)胞的可能機(jī)制進(jìn)行了相關(guān)探討。
　　第一部分 臨床分析:甲狀腺功能正常男性骨密度與血清TSH水平的關(guān)系
　　目的:
　　分析甲狀腺功能正常男性血清TSH水平與骨密度(BMD)變化的關(guān)系。
　　方法

2、:
　　以2009年10月-11月在濟(jì)南市陽光舜城社區(qū)調(diào)查的年齡在2075歲之間731例男性常住居民為研究對象（居住年限＞5年），嚴(yán)格按照排除標(biāo)準(zhǔn)納入，共有114名男性納入分析。采用羅氏檢測血清FT3、FT4、TSH，應(yīng)用雙能X線方法測量受檢者前臂BMD。記錄并整理研究對象基本資料，并分別根據(jù)TSH和BMD水平，將研究對象進(jìn)行分組，分析比較TSH與BMD的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　低TSH組與高TSH組兩組對象在年齡、B

3、MI、FT3、FT4上相匹配，TSH水平與BMD呈正相關(guān)，隨血清TSH濃度的升高，甲功正常男性BMD也隨之升高。
　　結(jié)論:
　　甲狀腺功能正常男性血清中TSH與BMD呈正相關(guān)，表明TSH能夠直接影響骨代謝。
　　第二部分 體外實(shí)驗(yàn):TSH對原代成骨細(xì)胞增殖及分化的影響
　　目的:
　　觀察在大鼠原代成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中，TSH對成骨細(xì)胞的增殖以及分化過程巾相關(guān)基因mRNA、蛋白表達(dá)的影響。
　　方

4、法:
　　取新生SD大鼠顱骨，采用改良二次酶消化法體外分離培養(yǎng)原代成骨細(xì)胞并進(jìn)行鑒定，加入不同濃度(1、10、100 mu/ml) TSH進(jìn)行處理，分別于加入處理后第12、24、48 h進(jìn)行MTT比色試驗(yàn)，觀察對其增殖的影響。利用Real-TimePCR檢測成骨細(xì)胞分化及調(diào)節(jié)相關(guān)基因堿性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型膠原(COⅠ1)、骨形成蛋白(BMP2)、Runx2 mRNA的表達(dá)變化;應(yīng)用ELISA法檢測TSH對ALP、BMP2蛋白表

5、達(dá)的影響;應(yīng)用Western blot方法檢測TSH對成骨細(xì)胞分化過程中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Runx2、Osterix蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　1.經(jīng)鑒定，體外分離提取的細(xì)胞為原代成骨細(xì)胞。
　　2.在TSH為100mu/ml時對成骨細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用并且作用最強(qiáng)，TSH為10mu/ml時對其增殖也有一定的促進(jìn)作用，但弱于前者，TSH為1mu/ml對成骨細(xì)胞的增殖無促進(jìn)作用。
　　3.RT-PCR表明與對照組

6、相比，實(shí)驗(yàn)組OB分化調(diào)節(jié)相關(guān)基因ALP、COⅠ1、BMP2、Runx2mRNA表達(dá)呈增加趨勢，并且不同濃度TSH可劑量依賴性增加這些基因mRNA表達(dá)。
　　4.ELISA結(jié)果示:與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組ALP、BMP2蛋白表達(dá)水平增高，與RT-PCR結(jié)果相一致。
　　5.Western-Blot結(jié)果示:與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組隨著TSH濃度增加Runx2、Osterix表達(dá)呈增高趨勢。
　　結(jié)論:
　　TSH可以促進(jìn)原代