促甲狀腺激素對男性骨代謝的影響及其機制的研究.pdf

1、骨質疏松癥在中老年人群中發(fā)病率越來越高，但其具體的發(fā)病機制仍未十分明確。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，促甲狀腺激素(TSH)可能直接影響骨代謝。本研究總共分為兩部分:臨床分析及體外實驗，針對TSH對男性骨代謝的影響及其進一步作用于成骨細胞的可能機制進行了相關探討。
　　第一部分 臨床分析:甲狀腺功能正常男性骨密度與血清TSH水平的關系
　　目的:
　　分析甲狀腺功能正常男性血清TSH水平與骨密度(BMD)變化的關系。
　　方法

2、:
　　以2009年10月-11月在濟南市陽光舜城社區(qū)調查的年齡在2075歲之間731例男性常住居民為研究對象（居住年限＞5年），嚴格按照排除標準納入，共有114名男性納入分析。采用羅氏檢測血清FT3、FT4、TSH，應用雙能X線方法測量受檢者前臂BMD。記錄并整理研究對象基本資料，并分別根據(jù)TSH和BMD水平，將研究對象進行分組，分析比較TSH與BMD的關系。
　　結果:
　　低TSH組與高TSH組兩組對象在年齡、B

3、MI、FT3、FT4上相匹配，TSH水平與BMD呈正相關，隨血清TSH濃度的升高，甲功正常男性BMD也隨之升高。
　　結論:
　　甲狀腺功能正常男性血清中TSH與BMD呈正相關，表明TSH能夠直接影響骨代謝。
　　第二部分 體外實驗:TSH對原代成骨細胞增殖及分化的影響
　　目的:
　　觀察在大鼠原代成骨細胞體外培養(yǎng)過程中，TSH對成骨細胞的增殖以及分化過程巾相關基因mRNA、蛋白表達的影響。
　　方

4、法:
　　取新生SD大鼠顱骨，采用改良二次酶消化法體外分離培養(yǎng)原代成骨細胞并進行鑒定，加入不同濃度(1、10、100 mu/ml) TSH進行處理，分別于加入處理后第12、24、48 h進行MTT比色試驗，觀察對其增殖的影響。利用Real-TimePCR檢測成骨細胞分化及調節(jié)相關基因堿性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型膠原(COⅠ1)、骨形成蛋白(BMP2)、Runx2 mRNA的表達變化;應用ELISA法檢測TSH對ALP、BMP2蛋白表

5、達的影響;應用Western blot方法檢測TSH對成骨細胞分化過程中關鍵轉錄因子Runx2、Osterix蛋白表達的影響。
　　結果:
　　1.經鑒定，體外分離提取的細胞為原代成骨細胞。
　　2.在TSH為100mu/ml時對成骨細胞的增殖具有促進作用并且作用最強，TSH為10mu/ml時對其增殖也有一定的促進作用，但弱于前者，TSH為1mu/ml對成骨細胞的增殖無促進作用。
　　3.RT-PCR表明與對照組

6、相比，實驗組OB分化調節(jié)相關基因ALP、COⅠ1、BMP2、Runx2mRNA表達呈增加趨勢，并且不同濃度TSH可劑量依賴性增加這些基因mRNA表達。
　　4.ELISA結果示:與對照組相比，實驗組ALP、BMP2蛋白表達水平增高，與RT-PCR結果相一致。
　　5.Western-Blot結果示:與對照組相比，實驗組隨著TSH濃度增加Runx2、Osterix表達呈增高趨勢。
　　結論:
　　TSH可以促進原代