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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病中發(fā)病率最高的惡性腫瘤,是最常見(jiàn)的甲狀腺惡性腫瘤,約占全身惡性腫瘤的1%。其中甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是最為常見(jiàn)的病理類型[1],約占成人甲狀腺癌的60%和兒童甲狀腺癌的全部。近幾十年間,甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈現(xiàn)出迅猛增長(zhǎng)的態(tài)勢(shì)。然而甲狀腺乳頭狀癌的惡性程度較低,即便較早出現(xiàn)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,但是預(yù)后較好,10年生存率仍能達(dá)到90%以上。目前被
2、公認(rèn)的甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)準(zhǔn)的綜合治療方式是手術(shù)切除治療以及術(shù)后輔助治療。手術(shù)治療是甲狀腺乳頭狀癌的基本治療方法,術(shù)后輔助治療可進(jìn)一步降低術(shù)后復(fù)發(fā)率。其中內(nèi)分泌治療在術(shù)后輔助治療中占據(jù)著重要地位。
內(nèi)分泌治療即為甲狀腺乳頭狀癌患者接受手術(shù)后應(yīng)終身服用甲狀腺素片,通過(guò)下丘腦-垂體-甲狀腺軸的自身調(diào)節(jié)來(lái)完成,其意義在于預(yù)防甲狀腺功能減退和抑制促甲狀腺素(thyroid stimulating hormone,TSH)。內(nèi)分泌治療甲狀腺
3、乳頭狀癌的主要依據(jù)為甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞內(nèi)存在TSH受體的表達(dá),而且分化程度越高的腫瘤,其TSH受體表達(dá)越高。患者通過(guò)口服藥物攝入適量的甲狀腺素,促使人體內(nèi)分泌的TSH減少,從而降低TSH對(duì)殘余癌組織的刺激。大部分臨床學(xué)者認(rèn)為,甲狀腺乳頭狀癌患者長(zhǎng)期使用促甲狀腺素(TSH)抑制劑量的甲狀腺素能降低復(fù)發(fā)率和死亡率[2,3]。特別是在甲狀腺乳頭狀癌的高危組,內(nèi)分泌治療可以使病人的無(wú)病生存率提高2-3倍[4]。
但是,患者長(zhǎng)期服用超生
4、理量甲狀腺素會(huì)有一定副作用產(chǎn)生。長(zhǎng)期TSH抑制會(huì)導(dǎo)致患者心率加快,頻發(fā)的房性期前收縮。據(jù)統(tǒng)計(jì),TSH抑制使房顫發(fā)生率比正常增加3倍[5]。并且長(zhǎng)期TSH抑制可導(dǎo)致絕經(jīng)后婦女患骨質(zhì)疏松癥的風(fēng)險(xiǎn)增高,但這一般不發(fā)生于絕經(jīng)前的女性[6]。而且TSH要發(fā)揮作用必須要與甲狀腺細(xì)胞膜上或細(xì)胞質(zhì)中促甲狀腺激素受體(TSHR)相結(jié)合。有研究表明:甲狀腺癌細(xì)胞的TSHR基因表達(dá)存在缺失[7]。TSHR在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較低,并且隨著分化型
5、甲狀腺癌臨床分期的增加TSHR陽(yáng)性表達(dá)率逐漸下降[8]。在甲狀腺乳頭狀癌中,TSH高含量與TSHR低表達(dá)形成矛盾。這其中的原因并不十分清楚,但是可以肯定的是:促甲狀腺素與促甲狀腺素受體之間的作用復(fù)雜,存在多種作用機(jī)制[9]。
近年來(lái),學(xué)術(shù)界對(duì)TSH治療在甲狀腺乳頭狀癌的抑制作用是否有效依然存在爭(zhēng)議。臨床實(shí)際工作中我們發(fā)現(xiàn):有一部分甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后的患者,規(guī)律口服甲狀腺素制劑治療的若干年后仍出現(xiàn)了腫瘤的復(fù)發(fā)以及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,
6、需要行二次手術(shù)。因此,為了有效降低TSH抑制治療副作的用發(fā)生,實(shí)施個(gè)體化治療具有重要意義。本研究旨在綜合探討TSH在體外培養(yǎng)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞中的作用和意義。
方法:取河北省醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院甲狀腺外科2014年10月-2015年1月間術(shù)中新鮮甲狀腺乳頭狀癌組織標(biāo)本5例,經(jīng)術(shù)中冰凍及術(shù)后石蠟病理證實(shí)。所有甲狀腺乳頭狀癌患者術(shù)前均未經(jīng)過(guò)放,化療。將新鮮組織30分鐘內(nèi)種植培養(yǎng)瓶中,培養(yǎng)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞。待長(zhǎng)成單層細(xì)胞后,分為四個(gè)組
7、,分別給予不同濃度的TSH(0mU/L、10mU/L、50mU/L、100mU/L),種于24孔培養(yǎng)板內(nèi)于實(shí)驗(yàn)10天運(yùn)用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞的增殖及凋亡進(jìn)行檢測(cè)。各數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn),檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:
1、甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的培養(yǎng)及觀察
甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞直接種植于培養(yǎng)瓶中,細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。細(xì)胞培養(yǎng)24h后,可見(jiàn)少量細(xì)胞貼壁,細(xì)胞呈橢圓形、梭形,可見(jiàn)偽足,細(xì)胞不再移動(dòng),貼壁主要見(jiàn)于細(xì)胞團(tuán)處
8、,但大量細(xì)胞仍懸浮未貼壁,呈圓形,隨培養(yǎng)液移動(dòng)。4-5d后,大量細(xì)胞貼壁。進(jìn)入甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的潛伏期,期間細(xì)胞的偽足進(jìn)一步伸長(zhǎng),細(xì)胞呈多角形,細(xì)胞核及細(xì)胞體積逐漸增大。5-7d后,細(xì)胞進(jìn)入生長(zhǎng)較快增殖期,細(xì)胞繼續(xù)伸長(zhǎng)且向四周生長(zhǎng),彼此連接,呈長(zhǎng)梭形,幾乎無(wú)圓形及橢圓形細(xì)胞,已貼滿培養(yǎng)瓶底一半以上。7-8d后,于培養(yǎng)瓶中形成單層細(xì)胞,于高倍鏡下可見(jiàn)圓形核仁及其他細(xì)胞器。
2、不同濃度的TSH培養(yǎng)細(xì)胞之間的比較
2.
9、1根據(jù)測(cè)定流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期,篩選增殖結(jié)果,通過(guò)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0,計(jì)算多個(gè)樣本的t檢驗(yàn),P<0.05,說(shuō)明各組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。繪制直方圖。測(cè)Pearson相關(guān)性R2=0.955,相關(guān)性良好且呈正相關(guān)。
2.2根據(jù)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡結(jié)果,均為小于5%。
結(jié)論:
1、TSH對(duì)體外培養(yǎng)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞有誘導(dǎo)增殖作用,且隨著TSH濃度的增加,誘導(dǎo)增殖的能力越強(qiáng)。
2、TSH對(duì)體外培養(yǎng)甲
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