甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞對(duì)促甲狀腺激素反應(yīng)性研究.pdf

1、目的:甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病中發(fā)病率最高的惡性腫瘤，是最常見(jiàn)的甲狀腺惡性腫瘤，約占全身惡性腫瘤的1％。其中甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是最為常見(jiàn)的病理類型[1]，約占成人甲狀腺癌的60％和兒童甲狀腺癌的全部。近幾十年間，甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈現(xiàn)出迅猛增長(zhǎng)的態(tài)勢(shì)。然而甲狀腺乳頭狀癌的惡性程度較低，即便較早出現(xiàn)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但是預(yù)后較好，10年生存率仍能達(dá)到90％以上。目前被

2、公認(rèn)的甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)準(zhǔn)的綜合治療方式是手術(shù)切除治療以及術(shù)后輔助治療。手術(shù)治療是甲狀腺乳頭狀癌的基本治療方法，術(shù)后輔助治療可進(jìn)一步降低術(shù)后復(fù)發(fā)率。其中內(nèi)分泌治療在術(shù)后輔助治療中占據(jù)著重要地位。
　　內(nèi)分泌治療即為甲狀腺乳頭狀癌患者接受手術(shù)后應(yīng)終身服用甲狀腺素片，通過(guò)下丘腦-垂體-甲狀腺軸的自身調(diào)節(jié)來(lái)完成，其意義在于預(yù)防甲狀腺功能減退和抑制促甲狀腺素(thyroid stimulating hormone，TSH)。內(nèi)分泌治療甲狀腺

3、乳頭狀癌的主要依據(jù)為甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞內(nèi)存在TSH受體的表達(dá)，而且分化程度越高的腫瘤，其TSH受體表達(dá)越高。患者通過(guò)口服藥物攝入適量的甲狀腺素，促使人體內(nèi)分泌的TSH減少，從而降低TSH對(duì)殘余癌組織的刺激。大部分臨床學(xué)者認(rèn)為，甲狀腺乳頭狀癌患者長(zhǎng)期使用促甲狀腺素(TSH)抑制劑量的甲狀腺素能降低復(fù)發(fā)率和死亡率[2,3]。特別是在甲狀腺乳頭狀癌的高危組，內(nèi)分泌治療可以使病人的無(wú)病生存率提高2-3倍[4]。
　　但是，患者長(zhǎng)期服用超生

4、理量甲狀腺素會(huì)有一定副作用產(chǎn)生。長(zhǎng)期TSH抑制會(huì)導(dǎo)致患者心率加快，頻發(fā)的房性期前收縮。據(jù)統(tǒng)計(jì)，TSH抑制使房顫發(fā)生率比正常增加3倍[5]。并且長(zhǎng)期TSH抑制可導(dǎo)致絕經(jīng)后婦女患骨質(zhì)疏松癥的風(fēng)險(xiǎn)增高，但這一般不發(fā)生于絕經(jīng)前的女性[6]。而且TSH要發(fā)揮作用必須要與甲狀腺細(xì)胞膜上或細(xì)胞質(zhì)中促甲狀腺激素受體(TSHR)相結(jié)合。有研究表明:甲狀腺癌細(xì)胞的TSHR基因表達(dá)存在缺失[7]。TSHR在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較低，并且隨著分化型

5、甲狀腺癌臨床分期的增加TSHR陽(yáng)性表達(dá)率逐漸下降[8]。在甲狀腺乳頭狀癌中，TSH高含量與TSHR低表達(dá)形成矛盾。這其中的原因并不十分清楚，但是可以肯定的是:促甲狀腺素與促甲狀腺素受體之間的作用復(fù)雜，存在多種作用機(jī)制[9]。
　　近年來(lái)，學(xué)術(shù)界對(duì)TSH治療在甲狀腺乳頭狀癌的抑制作用是否有效依然存在爭(zhēng)議。臨床實(shí)際工作中我們發(fā)現(xiàn):有一部分甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后的患者，規(guī)律口服甲狀腺素制劑治療的若干年后仍出現(xiàn)了腫瘤的復(fù)發(fā)以及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，

6、需要行二次手術(shù)。因此，為了有效降低TSH抑制治療副作的用發(fā)生，實(shí)施個(gè)體化治療具有重要意義。本研究旨在綜合探討TSH在體外培養(yǎng)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞中的作用和意義。
　　方法:取河北省醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院甲狀腺外科2014年10月-2015年1月間術(shù)中新鮮甲狀腺乳頭狀癌組織標(biāo)本5例，經(jīng)術(shù)中冰凍及術(shù)后石蠟病理證實(shí)。所有甲狀腺乳頭狀癌患者術(shù)前均未經(jīng)過(guò)放，化療。將新鮮組織30分鐘內(nèi)種植培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞。待長(zhǎng)成單層細(xì)胞后，分為四個(gè)組

7、，分別給予不同濃度的TSH(0mU/L、10mU/L、50mU/L、100mU/L)，種于24孔培養(yǎng)板內(nèi)于實(shí)驗(yàn)10天運(yùn)用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞的增殖及凋亡進(jìn)行檢測(cè)。各數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的培養(yǎng)及觀察
　　甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞直接種植于培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。細(xì)胞培養(yǎng)24h后，可見(jiàn)少量細(xì)胞貼壁，細(xì)胞呈橢圓形、梭形，可見(jiàn)偽足，細(xì)胞不再移動(dòng)，貼壁主要見(jiàn)于細(xì)胞團(tuán)處

8、，但大量細(xì)胞仍懸浮未貼壁，呈圓形，隨培養(yǎng)液移動(dòng)。4-5d后，大量細(xì)胞貼壁。進(jìn)入甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的潛伏期，期間細(xì)胞的偽足進(jìn)一步伸長(zhǎng)，細(xì)胞呈多角形，細(xì)胞核及細(xì)胞體積逐漸增大。5-7d后，細(xì)胞進(jìn)入生長(zhǎng)較快增殖期，細(xì)胞繼續(xù)伸長(zhǎng)且向四周生長(zhǎng)，彼此連接，呈長(zhǎng)梭形，幾乎無(wú)圓形及橢圓形細(xì)胞，已貼滿培養(yǎng)瓶底一半以上。7-8d后，于培養(yǎng)瓶中形成單層細(xì)胞，于高倍鏡下可見(jiàn)圓形核仁及其他細(xì)胞器。
　　2、不同濃度的TSH培養(yǎng)細(xì)胞之間的比較
　　2.

9、1根據(jù)測(cè)定流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期，篩選增殖結(jié)果，通過(guò)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0，計(jì)算多個(gè)樣本的t檢驗(yàn)，P＜0.05，說(shuō)明各組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。繪制直方圖。測(cè)Pearson相關(guān)性R2=0.955，相關(guān)性良好且呈正相關(guān)。
　　2.2根據(jù)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡結(jié)果，均為小于5％。
　　結(jié)論:
　　1、TSH對(duì)體外培養(yǎng)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞有誘導(dǎo)增殖作用，且隨著TSH濃度的增加，誘導(dǎo)增殖的能力越強(qiáng)。
　　2、TSH對(duì)體外培養(yǎng)甲