類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人骨髓中T細(xì)胞的異常表達(dá)及其在發(fā)病中作用機(jī)制的研究.pdf

1、本文分為兩個部分進(jìn)行探討：
　　第Ⅰ部分 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人軟骨下骨髓中Th17細(xì)胞和Th1細(xì)胞表達(dá)水平明顯升高，而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞則明顯降低
　　目的:
　　在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人中，未曾有Th17,Treg和Th1細(xì)胞在骨髓中研究報(bào)道。本次研究的目的是為了檢測Th17,Treg和Th1細(xì)胞在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人軟骨下骨髓中的表達(dá)情況并加以分析。從而闡明類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人骨髓中的一些免疫異常表現(xiàn)。通過對骨髓中致病性T細(xì)胞的檢

2、測分析，更加深入地了解類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人骨破壞時發(fā)生的骨免疫紊亂，從而對骨-免疫有了更深入的認(rèn)識，讓人們對軟骨下骨髓區(qū)域局部的免疫異常更加重視。并為RA發(fā)病機(jī)制研究提供新的方向，為患者的診治起到參考作用。
　　材料和方法:
　　(1)研究對象包括26例DAS28指數(shù)≥2.6的RA病人，11例OA患者和10例健康對照，保留其靜脈血及骨髓血，進(jìn)行流式細(xì)胞檢測分析。
　　(2)標(biāo)本行PMA、Monensin、Ionomyci

3、n4小時刺激后流式細(xì)胞測定，檢測外周血、骨髓血中Th以及細(xì)胞內(nèi)IL-17,IFN-γ和TNF-α的表達(dá)，從而得到外周血及骨髓血中Th17,Th1以及表達(dá)TNF-α的Th細(xì)胞的情況。
　　(3)收集病人及對照組的外周血及骨髓血，提取其單個核細(xì)胞，用Treg檢測盒子進(jìn)行處理，行CD4,CD25及Foxp3染色，檢測其Treg水平。
　　結(jié)果:
　　(1)外周血中，Th17細(xì)胞的表達(dá)在RA病人中顯著高于骨性關(guān)節(jié)炎病人組(P＜

4、0.05)以及健康對照組(P＜0.05)。骨髓中的Th17細(xì)胞表達(dá)更高，在骨髓血中，Th17細(xì)胞的表達(dá)在RA病人中也是明顯升高的，顯著高于骨性關(guān)節(jié)炎病人組(P＜0.05)以及健康對照組(P＜0.05)。更加有意義的是，在RA病人，其骨髓血中Th17細(xì)胞的比例較其外周血中是顯著升高的。這說明RA病人骨髓中免疫異常更加嚴(yán)重。
　　(2)然而，外周血中，Th1細(xì)胞的表達(dá)在RA病人中，與骨性關(guān)節(jié)炎病人組(P＜0.05)以及健康對照組(P＜

5、0.05)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但是RA病人骨髓中的Th1細(xì)胞表達(dá)明顯升高，在骨髓血中，Th1細(xì)胞的表達(dá)在RA病人中是明顯升高的，顯著高于骨性關(guān)節(jié)炎病人組(P＜0.05)以及健康對照組(P＜0.05)。更加有意義的是，在RA病人，其骨髓血中Th1細(xì)胞的比例較其外周血中是顯著升高的。外周血中，表達(dá)TNFα的Th細(xì)胞水平在RA病人中明顯升高，顯著高于骨性關(guān)節(jié)炎病人組以及健康對照組。骨髓中表達(dá)TNFα的Th細(xì)胞水平更高，在骨髓血中，其表達(dá)在RA病

6、人中是明顯升高的。而且在RA病人，其表達(dá)水平在骨髓血中的較其外周血中是顯著升高的。
　　(3)外周血中，RA患者的Treg亞群的表達(dá)，與OA患者Treg亞群的表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)，與對照相比較也是如此。然而，骨髓中的Treg細(xì)胞表達(dá)更低，在骨髓血中，Treg細(xì)胞的表達(dá)在RA病人中也是明顯降低的，顯著低于骨性關(guān)節(jié)炎病人組(P＜0.05)以及健康對照組(P＜0.05)。更加有意義的是，在RA病人，其骨髓血中Treg細(xì)胞的比例

7、較其外周血中是顯著降低的(P＜0.05)。這說明RA病人骨髓中免疫異常更加嚴(yán)重。
　　結(jié)論:
　　(1)RA患者中，其骨髓血中Th17亞群，Th1亞群以及表達(dá)TNF-α的Th亞群，三個亞群水平均明顯高于對照組及OA病人組，并且RA病人骨髓血中的Th17細(xì)胞，Th1細(xì)胞以及表達(dá)TNFα的Th細(xì)胞水平較其外周血中明顯升高;
　　(2)RA患者中，其骨髓血中Treg細(xì)胞水平較健康對照組及骨性關(guān)節(jié)炎組是異常降低的，并且RA病人

8、骨髓血中的Treg細(xì)胞較其外周血中明顯降低;
　　(3)骨髓中Th細(xì)胞各細(xì)胞群與Treg細(xì)胞之間均呈負(fù)相關(guān)性，說明兩種不同的細(xì)胞群之間存在著反向平衡。
　　第Ⅱ部分 Th22,Th17和Th1亞群及IL-22和IL-17在RA病人軟骨下骨髓中表達(dá)明顯升高
　　目的:
　　在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人中，有許多關(guān)于外周血和關(guān)節(jié)液中Th22,Th17和Th1細(xì)胞以及其相關(guān)細(xì)胞因子的研究報(bào)道。但是未曾有Th22,Th17和Th

9、1細(xì)胞及其主要效應(yīng)性細(xì)胞因子在骨髓中研究報(bào)道。本次研究的目的是為了檢測Th22,Th17和Th1細(xì)胞及其主要效應(yīng)性細(xì)胞因子在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人軟骨下骨髓中的表達(dá)情況并加以分析。從而闡明類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人骨髓中的一些免疫異常表現(xiàn)。
　　通過對骨髓中輔助性T細(xì)胞及其細(xì)胞因子的檢測分析，更加深入地了解類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人骨破壞時發(fā)生的骨免疫紊亂，從而對骨-免疫有了更深入的認(rèn)識，讓人們對軟骨下骨髓區(qū)域局部的免疫異常更加重視。并為今后該病的診

10、斷和治療起到一定的參考指導(dǎo)作用。
　　材料和方法:
　　(1)選擇40例DAS28指數(shù)≥2.6的RA病人，9例OA病人和9例對照，保留外周血及骨髓血，熒光染色后流式細(xì)胞檢測，并保留血漿檢測細(xì)胞因子。
　　(2)全血加PMA、Monensin、Ionomycin，刺激4小時，熒光染色后流式細(xì)胞檢測淋巴細(xì)胞表面CD4的表達(dá)以及細(xì)胞內(nèi)IL-22,IL-17和IFN-γ的表達(dá)，從而檢測Th22,Th17以及Th1亞群。

11、　　(3)收集兩組患者及對照的外周血及骨髓血血漿，進(jìn)行IL-22,IL-17和IFN-γ的ELISA，檢測這些因子的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)外周血中，Th22細(xì)胞亞群的表達(dá)的均值在RA病人、OA病人、健康對照分別是1.57±0.73％、0.85±0.22％、0.82±0.14％，分析顯示RA病人中Th22亞群遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于OA病人及健康對照(P＜0.05)。骨髓血檢測中，RA患者、OA患者、對照的Th22亞群的均值分別是2.

12、54±1.16％、0.85±0.19％、0.82±0.14％，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析可知，RA病人Th22細(xì)胞亞群的表達(dá)顯著高于OA病人及健康對照(P＜0.05)。更加有意義的是，在RA病人，其骨髓血中Th22細(xì)胞的比例較其外周血中是顯著升高的。這說明RA病人骨髓中免疫異常更加嚴(yán)重。
　　(2)外周血中，Th17細(xì)胞的表達(dá)在RA病人中明顯升高(2.02±0.75％)，顯著高于骨性關(guān)節(jié)炎病人組(1.01±0.26％，P＜0.05)以及健康對照組

13、(1.44±0.16％，P＜0.05)。骨髓中的Th17細(xì)胞表達(dá)更高，在骨髓血中，Th17細(xì)胞的表達(dá)在RA病人中是明顯升高的(2.83±1.00％)，顯著高于骨性關(guān)節(jié)炎病人組(1.00±0.22％，P＜0.05)以及健康對照組(1.02±0.14％，P＜0.05)。更加有意義的是，在RA病人，其骨髓血中Th17細(xì)胞的比例較其外周血中是顯著升高的。然而，外周血中，Th1細(xì)胞的表達(dá)在RA病人中(19.9±7.71％)，與骨性關(guān)節(jié)炎病人組(1

14、9.9±1.6％，P＜0.05)以及健康對照組(20.6±1.50％，P＜0.05)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但是RA病人骨髓中的Th1細(xì)胞表達(dá)明顯升高，在骨髓血中，Th1細(xì)胞的表達(dá)在RA病人中是明顯升高的(31.7±11.5％)，顯著高于骨性關(guān)節(jié)炎病人組(24.2±3.37％，P＜0.05)以及健康對照組(23.7±3.71％，P＜0.05)。更加有意義的是，在RA病人，其骨髓血中Th1細(xì)胞的比例較其外周血中是顯著升高的。
　　(3)R

15、A病人外周血血漿中IL-22濃度水平明顯升高(37.5±7.6 pg/ml，P＜0.05)，顯著高于骨性關(guān)節(jié)炎病人組(22.4±1.66pg/ml，P＜0.05)以及健康對照組(22.4±1.45 pg/ml，P＜0.05)。RA病人外周血血漿中IL-17的水平在RA病人組(7.59±3.38 pg/ml，P＜0.05)也是顯著高于骨性關(guān)節(jié)炎病人組(4.66±0.95pg/ml，P＜0.05)以及健康對照組(4.55±0.62 pg/m

16、l，P＜0.05)的。在RA病人骨髓血漿中(39.89±14.2 pg/ml，P＜0.05)，IL-22的水平較OA病人(23.4±1.96pg/ml，P＜0.05)及健康組(14.55±2.89 pg/ml，P＜0.05)也是顯著升高的。同樣的，RA病人(12.3±5.66 pg/ml，P＜0.05)骨髓中IL-17的水平較OA病人(5.08±0.76 pg/ml，P＞0.05)及健康組(5.06±0.94 pg/ml，P＞0.05)

17、也是顯著升高的。但是，RA病人外周血及骨髓血中的IFN-γ水平和OA病人以及健康人無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并且RA病人骨髓血和外周血血漿中該因子水平也無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　(1)相對于OA組及對照，RA患者骨髓血中Th22亞群，Th17亞群以及Th1亞群水平是顯著增高的，而且與RA患者外周血相比，也是顯著升高;
　　(2)RA病人外周血及骨髓血漿中的IL-22及IL-17水平較OA組及對照是顯著升高的，并且IL-22

18、及IL-17在骨髓中表達(dá)較外周血中也是顯著升高;
　　(3)骨髓中Th22細(xì)胞，Th17細(xì)胞以及Th1細(xì)胞各細(xì)胞群之間均呈正相關(guān)性，各細(xì)胞均是一致性增高的。并且類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人骨髓中Th22細(xì)胞，Th17細(xì)胞與其相應(yīng)的細(xì)胞因子IL-22及IL-17呈一致性升高。
　　(4)在RA病人中，隨著RA病人疾病活動性的增加其骨髓中Th22細(xì)胞，Th17細(xì)胞與其相應(yīng)的細(xì)胞因子IL-22及IL-17均升高，這說明RA患者骨髓血中這兩種