金氏真蛇尾(Ophiura kinbergi)皂苷的制備及其生物活性研究.pdf

1、本論文以采自煙臺(tái)崆峒島海域的金氏真蛇尾（Ophiura kinbergi）作為原材料，提取了其中的活性物質(zhì)皂苷，然后探究了什么樣的條件下才能有最大提取率，然后將分離純化后的金氏真蛇尾皂苷進(jìn)行最基本物理化學(xué)方面的研究，并進(jìn)一步研究了金氏真蛇尾皂苷的抗氧化活性、抑菌活性和抗腫瘤活性。隨后對(duì)已提取過(guò)皂苷的金氏真蛇尾殘?jiān)M(jìn)行處理，從中提取金氏真蛇尾多糖，并進(jìn)一步探究其抗氧化活性和抑菌活性。
　　在對(duì)金氏真蛇尾皂苷的最佳提取工藝研究中，采用

2、了單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)兩種方法，結(jié)果表明，金氏真蛇尾皂苷的最佳提取條件為：采用體積分?jǐn)?shù)為85％的乙醇溶液作為浸提液，提取溫度為60℃，料液比（m/V）為1:40，重復(fù)提取3次，每次提取3小時(shí)。
　　采用溶劑（85%的乙醇溶液）浸提法得到金氏真蛇尾粗皂苷，將粗皂苷過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂以分離除去部分多糖、無(wú)機(jī)鹽和色素，并用洗脫液（去離子水、體積分?jǐn)?shù)為20%的乙醇溶液、40%的乙醇溶液、60%的乙醇溶液、80%的乙醇溶液）依次洗脫，并收集

3、各個(gè)洗脫組分。隨后將80%的乙醇溶液洗脫組分進(jìn)行硅膠柱層析和薄層層析。
　　皂苷種類的鑒定結(jié)果表明金氏真蛇尾皂苷為甾體皂苷；然后將其置于200-800nm的紫外波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，并與標(biāo)準(zhǔn)皂苷進(jìn)行比較，結(jié)果為在215nm處有最大吸收峰。并測(cè)定其熔點(diǎn)范圍為241～256℃。
　　通過(guò)測(cè)定金氏真蛇尾皂苷的總還原力和對(duì)氧自由基（羥基自由基和超氧陰離子）的清除作用來(lái)測(cè)定其抗氧化活性，結(jié)果為：金氏真蛇尾皂苷的總還原力OD值為1.403

4、，此結(jié)果表明金氏真蛇尾皂苷具有一定的抗氧化活性，且金氏真蛇尾皂苷對(duì)氧自由基有抑制作用。
　　采用濾紙片法和最低抑菌濃度法（MIC）來(lái)測(cè)定金氏真蛇尾皂苷的對(duì)大腸桿菌(Escherichia coli)、啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)、青霉(Penicillium glaucum)和金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus aureusRosenbach)的抑制作用。結(jié)果表明金氏真蛇尾

5、皂苷對(duì)此四種受試菌的抑菌圈大小分別為：大腸桿菌最大為16.4mm，金黃色葡萄球菌和啤酒酵母菌次之分別為12.5mm和12.2mm，青霉最弱為10.8mm。金氏真蛇尾皂苷對(duì)此四種受試菌的MIC依次為：1.0mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL和4.0mg/mL。
　　金氏真蛇尾皂苷的抗腫瘤活性主要針對(duì)HL-60細(xì)胞（白血病細(xì)胞）和SK細(xì)胞（神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞）采用SRB法進(jìn)行研究。結(jié)果表明，金氏真蛇尾皂苷對(duì)HL-60細(xì)胞在10

6、0μg/mL時(shí)有最大抑制率為28.7%，對(duì)SK細(xì)胞在100μg/mL時(shí)有最大抑制率為26.4%。鑒于以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們建議將金氏真蛇尾皂苷往保健品方向發(fā)展。
　　為了更大限度的利用金氏真蛇尾資源，又從金氏真蛇尾殘?jiān)刑崛〉玫搅舜侄嗵恰２捎脡A提法得金氏真蛇尾多糖，采用苯酚-硫酸法，測(cè)得金氏真蛇尾多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.4455x+0.0047(相關(guān)系數(shù)R2=0.9967)，多糖含量為3.18%；單糖測(cè)定結(jié)果為多糖中含游離性單

7、糖；而碘-碘化鉀反應(yīng)的結(jié)果是陰性，表明金氏真蛇尾多糖是非淀粉多糖。
　　金氏真蛇尾多糖的抗氧化活性測(cè)定與其皂苷的抗氧化活性測(cè)定相一致，實(shí)驗(yàn)測(cè)得金氏真蛇尾多糖的總還原力OD值為1.145，表明其具有一定的抗氧化活性；且金氏真蛇尾多糖對(duì)氧自由基有抑制作用。
　　金氏真蛇尾多糖的抑菌活性測(cè)定同樣也是采用濾紙片法測(cè)定其抑菌圈大小和MIC法測(cè)定其最低抑菌濃度。其抑菌圈大小測(cè)定結(jié)果為：大腸桿菌為13.46mm，金黃色葡萄球菌為14.12