扇貝邊多肽制備及其生物活性研究.pdf

1、海灣扇貝是一種具有很高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的雙殼類(lèi)動(dòng)物，目前在我國(guó)東部沿海廣泛養(yǎng)殖。在生產(chǎn)扇貝柱(干貝)的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量低值副產(chǎn)物(包括裙邊、貝殼、生殖腺)，這些副產(chǎn)物容易腐爛，會(huì)引起環(huán)境污染。海灣扇貝邊蛋白質(zhì)含量較高，是制備活性肽（蛋白酶解物）的良好原料。本論文分析了海灣扇貝邊的化學(xué)組成，優(yōu)化了海灣扇貝邊蛋白酶解的條件，并對(duì)酶解產(chǎn)物的部分生物活性進(jìn)行了研究。本研究為海灣扇貝邊的開(kāi)發(fā)與利用提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　研究結(jié)果顯示：扇貝邊干粉

2、營(yíng)養(yǎng)豐富，總蛋白質(zhì)的含量為68.16g/100g，總脂肪含量為3.50g/100g，水分含量為5.50g/100g，多糖含量為1.43g/100g，灰分含量為11.80g/100g。17種氨基酸的總量為69.30g/100g，人體必需氨基酸（色氨酸除外）含量為22.79g/100g。具有較強(qiáng)還原能力的半胱氨酸的含量為5.86g/100g，是扇貝邊酶解多肽具有較強(qiáng)抗氧化活性的主要原因之一。共檢測(cè)了27種脂肪酸的相對(duì)含量。其中飽和脂肪酸含量

3、為27.53％，不飽和脂肪酸的含量為56.19%。油酸的相對(duì)含量最高為21.66%，其次為棕櫚酸和亞油酸。
　　以水解度為考察指標(biāo)，對(duì)中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶水解扇貝邊的能力進(jìn)行了探究。發(fā)現(xiàn)堿性蛋白酶對(duì)扇貝邊的水解能力最強(qiáng)，因此確定利用堿性蛋白酶來(lái)水解扇貝邊制備酶解多肽。利用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)堿性蛋白酶水解扇貝邊的條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果顯示：影響堿性蛋白酶活性的各因素的排列順序?yàn)閜H、溫度、底物濃度與酶濃度

4、的比值（[S]/[E]）、時(shí)間。最佳水解條件：[S]/[E]為12、時(shí)間為4h、溫度為60℃、pH為10。在此條件下水解率為30.1%。探究了活性炭對(duì)扇貝邊酶解液的脫色效果。當(dāng)活性炭用量為2%、時(shí)間為60min、溫度為40℃、pH為6時(shí)脫色效果最好。
　　利用快速蛋白液相色譜（FPLC）、高效液相色譜（HPLC）和十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）技術(shù)對(duì)扇貝邊酶解液中多肽的組成及其主要組分的分子量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)

5、果表明扇貝邊酶解多肽中主要有3種多肽成分，它們的分子量分別為7.87、3.54和0.91kD。
　　以谷胱甘肽為對(duì)照物，探究了扇貝邊酶解多肽的抗氧化能力。結(jié)果表明，扇貝邊酶解多肽對(duì)羥自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH自由基）和ABTS+自由基的清除能力與酶解多肽的濃度呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。隨著酶解多肽濃度的增加，對(duì)3種自由基的清除能力逐漸增大。當(dāng)酶解多肽的濃度分別為0.20mg/mL、0.20mg/mL和0.25

6、mg/mL時(shí)，其對(duì)羥自由基、DPPH自由基和ABTS+自由基的清除率達(dá)到最大值，分別為65.5%、79.3%和62.3%。以羥自由基清除率和DPPH自由基清除率為指標(biāo)分別測(cè)定了分子量大于3kD和小于3 kD的多肽組分的抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)分子量小于3kD的多肽組分有較強(qiáng)的抗氧化能力。
　　考察了扇貝邊酶解多肽的降血壓和降血糖活性。當(dāng)扇貝邊酶解多肽的濃度為0.40mg/mL和0.50mg/mL時(shí)，其對(duì)ACE酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率達(dá)到

7、最大值，分別為65.1%和54.8%。IC50值分別為0.32mg/mL和0.38mg/mL。以對(duì)ACE酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率為指標(biāo)測(cè)定了分子量大于3kD和小于3kD的多肽組分的降血壓和降血糖活性，發(fā)現(xiàn)分子量小于3kD的多肽組分具有較強(qiáng)的降血壓和降血糖活性。
　　本論文利用百草枯對(duì)模型組和治療組小鼠進(jìn)行灌胃造模，利用扇貝邊酶解多肽對(duì)治療組的小鼠進(jìn)行灌胃治療。分別于造模后14天和28天進(jìn)行肺組織取材，對(duì)肺組織進(jìn)行HE染色并測(cè)定肺