膀胱癌組織特異性溶瘤腺病毒的安全性評(píng)估.pdf

1、目的：對(duì)于膀胱癌的治療目前仍以手術(shù)、放療、化療為主；此外，還包括輔助性化療以提高腫瘤的治療效果。盡管如此，但是膀胱癌仍有較高的的復(fù)發(fā)率。新型膀胱癌特異性溶瘤腺病毒的研究已成為當(dāng)代膀胱癌生物治療研究的熱點(diǎn)，它可以在膀胱腫瘤細(xì)胞內(nèi)特異性的增殖并且殺滅腫瘤腫瘤細(xì)胞，是腫瘤靶向治療的重要方法。目前對(duì)溶瘤腺病毒的療效已經(jīng)進(jìn)行了相應(yīng)的研究，但是安全性和毒性仍存在較大的爭(zhēng)議，并且已報(bào)道的溶瘤腺病毒的毒性主要集中于急性毒性實(shí)驗(yàn)和長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)，對(duì)于溶瘤腺

2、病毒的生殖毒性的研究仍未見(jiàn)報(bào)道。因此本課題將我們實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的膀胱癌特異性溶瘤腺病毒 Ad-PSCAE-U PⅡ-E1A(APU-E1A)進(jìn)行一般生殖毒性實(shí)驗(yàn)和致畸毒性實(shí)驗(yàn)；評(píng)價(jià)胎鼠的骨骼結(jié)構(gòu)，并且觀察F1代的實(shí)質(zhì)內(nèi)臟組織的發(fā)育情況。為溶瘤腺病毒的安全性提供基本的數(shù)據(jù)支持。
　　方法：我們委托北京五加和公司將我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建完成的膀胱癌特異性溶瘤腺病毒 Ad-PSCAE-UPⅡ-E1A(APU-E1A)進(jìn)行擴(kuò)增、純化和鑒定。小鼠購(gòu)

3、買與甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。整個(gè)安全性評(píng)價(jià)體系分為三部分：急性毒性實(shí)驗(yàn)，一般生殖毒和致畸毒性實(shí)驗(yàn)。急性毒性是將擴(kuò)增的溶瘤腺病毒以腹腔給藥的方式一次性注射進(jìn)入小鼠的腹腔，觀察小鼠的行為改變和體重的變化，14天后處死小鼠檢測(cè)小鼠血液中淋巴細(xì)胞和血小板以及肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平的測(cè)定；病理組織的切片進(jìn)行HE染色后,觀察溶瘤腺病毒對(duì)于各組織臟器的鏡下病理改變。一般生殖毒性實(shí)驗(yàn)是指將小鼠給藥之后，進(jìn)行合籠交配，觀察胎

4、鼠和子代小鼠的發(fā)育情況；首先處理雄性小鼠：先將雄性小鼠連續(xù)給藥28天，給藥方式為肌肉注射，給藥的時(shí)間為隔日給藥；雌性小鼠，在雄性小鼠給藥兩周后開始給藥，連續(xù)給藥14天，給藥方式為肌肉注射，給藥時(shí)間為隔日給藥；完成給藥后將雌雄小鼠合籠交配。交配成功后將受孕小鼠分為兩部分，一部分在受孕16天后進(jìn)行安樂(lè)死，然后取出胎鼠，去除內(nèi)臟和皮膚進(jìn)行骨骼染色，觀察骨骼改變。另一部分自然分娩，將出生后的小鼠飼養(yǎng)30天后處死，測(cè)定小鼠的體重變化，并且對(duì)各組織

5、進(jìn)行病理切片，觀察組織在在鏡下改變。致畸毒性實(shí)給藥方案：將交配后的雌性小鼠在第六天開始給藥，隔日給藥一次，直到受孕后第14天；一部分在第16天后安樂(lè)死，取出胎鼠，觀察胚胎骨骼結(jié)構(gòu)的變化，另一部分自然分娩后，自然生長(zhǎng)30天，觀察生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的改變，然后將小鼠處死，將各組織制作成病理切片，觀察進(jìn)行HE染色后的鏡下改變。
　　結(jié)果：在小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)中，小鼠出現(xiàn)扭體等腹痛的體征，實(shí)驗(yàn)組小鼠的體重增加快于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異；另外

6、在小鼠的解剖發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠的的腹腔出現(xiàn)血性腹水，肝臟呈現(xiàn)出亞急性重型肝炎的表現(xiàn)，鏡下觀察小鼠的肝臟組織呈現(xiàn)出嚴(yán)重的肝組織壞死，正常的肝小葉結(jié)構(gòu)遭到破壞；其他組織臟器均無(wú)明顯的變化。在一般生殖毒實(shí)驗(yàn)的研究中發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組與低劑量組、中劑量組、高劑量組之間比較，各組之間胎鼠的窩重和胎盤重均無(wú)明顯的改變，胎鼠的體長(zhǎng)和尾長(zhǎng)之間的差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義，小鼠的骨骼染色均顯示正常，在子一代的發(fā)育過(guò)程之中，各組之間小鼠的體重改變有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義，但是這種差

7、異通過(guò)小鼠的體重增長(zhǎng)變化的曲線發(fā)現(xiàn)差異不大，這可能是由于個(gè)體之間的差異和受孕時(shí)雌鼠的體重不同造成的。在小鼠的致畸毒性實(shí)驗(yàn)的過(guò)程之中，低中高三個(gè)劑量組與對(duì)照組之間進(jìn)行比較，胎鼠的胎盤和窩重各組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在胎鼠的體長(zhǎng)和尾長(zhǎng)之間的差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義，在子一代的發(fā)育過(guò)程之中，小鼠的體重增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義，但是從小鼠的生長(zhǎng)曲線上看，這種差異不大，由于小鼠的各組之間生長(zhǎng)曲線顯示各組之間的差異不大，所以不認(rèn)為這是由于溶瘤腺病毒所引起。

8、
　　結(jié)論：所構(gòu)建的膀胱組織特異性溶瘤腺病毒（（Ad-PSCAE-UPII-E1A-AR(APU-E1A-AR)在急性毒性試驗(yàn)中，可能具有較為嚴(yán)重的肝臟毒性，肝臟可能為溶瘤腺病毒的靶器官；另外在給予治療劑量的100倍時(shí)，無(wú)小鼠死亡，說(shuō)明此種腺病毒的安全性還是值得肯定的。在小鼠的一般生殖毒性試驗(yàn)和致畸毒性實(shí)驗(yàn)中，各組織間的差異不是很大，無(wú)明顯的改變，因此，認(rèn)為我們所構(gòu)建的溶瘤腺病毒對(duì)于小鼠的生殖系統(tǒng)的影響不大，是一種相對(duì)較為安全的腫